背景[1-3]
猪D二聚体(D2D)ELISA KIT采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法检测样本中猪D二聚体(D2D)的含量。
原理：用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被猪D二聚体(D2D)的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的猪D二聚体(D2D)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪D二聚体(D2D)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
猪D二聚体(D2D)ELISA KIT
猪D二聚体(D2D)ELISA KIT操作步骤：
1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
用于晚期非小细胞肺癌D-二聚体、纤维蛋白原水平与化疗效果关系的研究
通过测定晚期非小细胞肺癌患者化疗前及化疗过程中体内血浆D-二聚体及纤维蛋白原水平,研究二者的异常升高和变化与一线化疗的治疗效果和无进展生存期的关系,探讨两个指标在判断肿瘤进展和预测化疗效果中的意义。
方法：分析组织病理学或细胞学确诊为晚期（ⅢB期及Ⅳ期）非小细胞肺癌（NSCLC）的患者55例,收集其临床资料,包括次化疗、第二次化疗与第三次化疗前患者的血浆D-二聚体、纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）水平,肿瘤的病理类型、分期及无进展生存期（progression-free survival,PFS）,同时收集30例门诊健康体检者的相关指标（血浆D-二聚体D、纤维蛋白原F）作对照,使用SPSS17.0进行统计学分析,研究晚期NSCLC患者化疗前血浆D-二聚体与纤维蛋白原水平的升高及化疗过程中二者水平的变化与肺癌的进展和治疗效果是否存在相关性。
结果1.化疗前晚期NSCLC患者D-二聚体和FIB的升高表现与年龄、性别、肿瘤的分期和病理类型均不相关,各P值均大于0.05（P=0.311,P=0.448,P=0.232,P=0.670）。
2. 化疗前晚期NSCLC患者血浆D-二聚体和FIB的中位数分别为0.97mg/L和4.35g/L,对照组的中位数分别为0.485mg/L和3.85g/L,对照组显著低于NSCLC组,且差异有统计学意义（p=0.000,p=0.004）。
3.化疗两周期后有效（PR+SD）的晚期NSCLC患者,其化疗前血浆D-二聚体和FIB的中位数分别为0.69mg/L和2.75g/L,无效（PD）的患者中位数分别为1.75mg/L和4.63g/L。有效组水平显著低于无效组,其差异有统计学意义（P=0.000,P=0.001）。
参考文献
[1]Global cancer statistics,2012[J].Lindsey A.Torre,Freddie Bray,Rebecca L.Siegel,Jacques Ferlay,Joannie Lortet‐Tieulent,Ahmedin Jemal.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2015(2)
[2]Lung cancer chemotherapy agents increase procoagulant activity via protein disulfide isomerase-dependent tissue factor decryption[J].Zakhar Lysov,Laura L.Swystun,Sara Kuruvilla,Andrew Arnold,Patricia C.Liaw.Blood Coagulation&Fibrinolysis.2015(1)
[3]Prognostic and predictive value of plasma D-dimer in advanced non-small cell lung cancer patients undergoing first-line chemotherapy[J].L.-P.Ge,J.Li,Q.-L.Bao,P.Chen,Q.Jiang,L.-R.Zhu.Clinical and Translational Oncology.2015(1)
[4]Early venous thromboembolic events are associated with worse prognosis in patients with lung cancer[J].Taxiarchis V.Kourelis,Ewa M.Wysokinska,Yi Wang,Ping Yang,Aaron S.Mansfield,Alfonso J.Tafur.Lung Cancer.2014
[5]丁宁.晚期非小细胞肺癌D-二聚体、纤维蛋白原水平与化疗效果关系的研究[D].山东大学,2015.