背景[1-3]
兔子凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附法(ELISA)检测样本中兔子凝血酶受体(TR)的含量。
实验原理:已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
兔子凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
应用[4][5]
用于葱白提取物防治兔创伤性下肢深静脉血栓形成的机制研究
为葱白提取物在防治DVT方面提供直接而客观的现代医学证据。
方法1.随机将新西兰白兔24只分为模型对照组、葱白治疗组和葱白防治组。按照赵学凌的方法构建兔下肢创伤性DVT模型,造模成功后,模型对照组给予生理盐水1周,葱白治疗组给予葱白提取物1周,葱白防治组造模前持续给予葱白提取物1周,造模后同葱白治疗组。
2. 检测以下指标:(1)造模前后P-选择素(CD62P)、血小板活化因子(PAF)和溶酶体膜蛋白(CD63)的变化;(2)造模前后血小板膜糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)及凝血酶受体-1(PAR-1)、凝血酶受体-4(PAR-4)的变化;
(3)造模前后各组活化蛋白C(APC)和血浆前体蛋白(TpP)的变化;
(4)造模前后各组凝血功能、血浆凝血酶调节蛋白(TM)和D-二聚体(D-D)的变化;
(5)造模前后组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)、纤溶酶原活化剂抑制物(PAI)的变化;
(6)造模前后各组血液流变学的变化;
(7)造模前后血清白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)的变化;
(8)造模前后各组超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化。
结果:大体观察模型对照组、葱白治疗组和葱白防治组造模成功后,双下肢均出现不同程度的弥散性肿胀,但防治组造模后其肿胀程度明显低于模型对照组及治疗组。造模7天后拆除石膏三组兔子均无明显的肿胀,但皮下淤血面积葱白防治组较模型对照组及葱白治疗组小,其中葱白治疗组1只和模型对照组2只兔子在拆除石膏时突然死亡,经解剖确认为肺栓塞死亡。
参考文献
[1]Thrombosis Risk Assessment as a Guide to Quality Patient Care[J].Joseph A.Caprini.Disease-a-Month.2005(2)
[2]Relation of Timing of Cardiac Catheterization to Outcomes in Patients With Non–ST-Segment Elevation Myocardial Infarction or Unstable Angina Pectoris Enrolled in the Multinational Global Registry of Acute Coronary Events[J].Gilles Montalescot,Omar H.Dabbous,Michael J.Lim,Marcus D.Flather,Rajendra H.Mehta.The American Journal of Cardiology.2005(12)
[3]Possible vascular-bed-specific role of interleukin-6 in young women with a history of myocardial infarction,lacunar cerebral infarction and deep vein thrombosis[J].Cytokine.2004(6)
[4]Enoxaparin and heparin comparison of deep vein thrombosis prophylaxis in total hip replacement patients[J].Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery.2006(1)
[5]张晨.葱白提取物防治兔创伤性下肢深静脉血栓形成的机制研究[D].湖北中医药大学,2011.