背景[1-3]
大鼠乙酰辅酶A羧化酶1(ACACA)ELISA KIT采用竞争法检测样本中乙酰辅酶A羧化酶1(ACACA)的含量。
原理：向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本，再加入生物素标记的识别抗原，在37℃下孵育30min，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原，然后加入亲和素-HRP，在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合，洗涤后结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
大鼠乙酰辅酶A羧化酶1(ACACA)ELISA KIT
操作程序
1)使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
2)空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
3)标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
4)样品孔：加入样品50μl（推荐直接加样，浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍），然后加入生物素抗原工作液50μl。
5)轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
6)将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
7)次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
8)加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
9)第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
10)显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
11)终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色).
12)测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后10分钟以内进行。
13)计算：根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用专用计算软件进行计算，推荐使用ELISAcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线。
应用[4][5]
用于2型糖尿病大鼠骨骼肌组织乙酰辅酶A羧化酶、甘油三酯水平的观察研究
比较正常大鼠、高脂饮食大鼠及糖尿病大鼠骨骼肌中ACC的表达及其血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）的水平、探讨ACC在糖尿病发生发展中的作用,为糖尿病的防治提供依据。
方法:1.购买雄性SD大鼠并分组:正常饮食组、高脂饮食组、2型糖尿病组。
2. 动物模型制备:制备2型糖尿病大鼠模型及高脂饮食大鼠模型。
3. 造模成功后将所有大鼠于腹主动脉采血高速离心后分离血清,用全自动生化检测仪测定TC（总胆固醇）、TG（甘油三酯）、FBG（空腹血糖）,高压液相色谱法测定HbA1c（糖化血红蛋白）;
4. 留取大鼠股四头肌标本,-80℃保存备用。使用western-blot（蛋白印迹法）测定骨骼肌ACC蛋白表达,结果用样品的吸光度与β-Actin的吸光度比值表示。
5. 采用SPSS20.0统计软件分析所有实验数据。计量资料采用均数±标准差（`X±S）表示,多组间比较使用方差分析。以P<0.05表示差异有统计学意义。
结果:1.大鼠模型造模成功,最终3组大鼠数量:正常饮食组为10只、高脂饮食组为10只、2型糖尿病组为10只。
2.3组大鼠体重水平比较:正常饮食组体重为（407.86±23.0g/只）,与正常饮食组相比,2型糖尿病组大鼠的体重（313.18±21.27 g/只）偏低,高脂饮食组大鼠的体重（434.65±26.23g/只）偏高（P<0.05）。血糖水平比较:正常饮食组FBG、HbA1c分别为（5.07±0.30mmol/L、4.44±0.66%）,高脂饮食组与2型糖尿病组分别为（7.91±1.43mmol/L、7.73±1.28%）、（14.11±1.54mmol/L、11.37±0.67%）较正常饮食组升高（P<0.05）,且2型糖尿病组较高脂饮食组更高（P<0.05）。血脂水平比较:正常饮食组TC、TG分别为（1.67±0.22mmol/L、0.68±0.11mmol/L）高脂饮食组与2型糖尿病组分别为（2.66±0.33mmol/L、2.01±0.19mmol/L）（2.77±0.23mmol/L、2.05±0.17mmol/L）,较正常饮食组升高（P<0.05）,但高脂饮食组与2型糖尿病组之间差异无统计学意义（P>0.05）。
3.3组大鼠骨骼肌ACC水平比较:与正常饮食组（0.47±0.18）比较,2型糖尿病组（1.15±0.18）和高脂饮食组（0.91±0.25）大鼠的ACC表达水平更高（P<0.05）;与高脂饮食组比较,2型糖尿病组大鼠的ACC表达水平也更高（P<0.05）。结论:糖尿病大鼠骨骼肌中ACC的表达水平,与其糖代谢、脂代谢有着密切关系,提示其参与糖尿病的发生发展。
参考文献
[1]Specific Hepatic Sphingolipids Relate to Insulin Resistance,Oxidative Stress,and Inflammation in Nonalcoholic Steatohepatitis[J].Maria Apostolopoulou,Ruth Gordillo,Chrysi Koliaki,Sofia Gancheva,Tomas Jelenik,Elisabetta De Filippo,Christian Herder,Daniel Markgraf,Frank Jankowiak,Irene Esposito,Matthias Schlensak,Philipp E Scherer,Michael Roden.Diabetes Care.2018(6)
[2]Dipeptidyl peptidase-4 inhibitor enhances restoration of salivary glands impaired by obese-insulin resistance[J].Jitjiroj Ittichaicharoen,Nattayaporn Apaijai,Pongpan Tanajak,Piangkwan Sa-nguanmoo,Nipon Chattipakorn,Siriporn Chattipakorn.Archives of Oral Biology.2018
[3]Chronic intestinal electrical stimulation improves glucose intolerance and insulin resistance in diet‐induced obesity rats[J].Shiying Li,Weijian Zhu,Sujuan Zhang,Jiande D.Z.Chen.Obesity.2017(6)
[4]Acute dietary fat intake initiates alterations in energy metabolism and insulin resistance[J].Elisaálvarez Hernández,Sabine Kahl,Anett Seelig,Paul Begovatz,Martin Irmler,Yuliya Kupriyanova,Bettina Nowotny,Peter Nowotny,Christian Herder,Cristina Barosa,Filipa Carvalho,Jan Rozman,Susanne Neschen,John G Jones,Johannes Beckers,Martin Hrabìde Angelis,Michael Roden.Journal of Clinical Investigation.2017(2)
[5]唐剑.2型糖尿病大鼠骨骼肌组织乙酰辅酶A羧化酶、甘油三酯水平的观察研究[D].石河子大学,2020.