背景[1-3]
猪肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒运用双抗夹心ELISA法定量测定血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中猪肌酸激酶(CK)含量。
实验原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被猪肌酸激酶（CK）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪肌酸激酶（CK）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
猪肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒
样本处理：
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
猪肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒实验操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于肌酸激酶（CK）家族与膝骨关节炎相关性的实验研究
探究膝关节骨关节炎（KOA）患者的CK家族活性变化,及其与OA影像学分级的关系;了解CK家族与KOA患者抗氧化酶SOD的相关性,探讨CK家族是否与OA疾病及氧化应激机制的相关。
方法:本文系统研究回顾了100例健康人群、103例膝关节OA患者人群的血清指标。采用免疫抑制率法测定两组血清CK-MB和CK水平。利用计算的方法得出CK-MM、CK-MB/CK、CK-MB/CK。采用独立样本t检验比较KOA患者与健康对照组血清（CK-MB、CK-MM、CK、CK-MB/CK、CK-MM/CK）水平,分析CK家族在KOA患者中血清学特征。
同时分析这些血清指标与Kellgren-Lawrence（KL）分级的相关性。血清SOD活性采用比色法测定,利用SOD活性变化进行氧化应激KOA人群造模。然后利用此人群中肌酸激酶家族及SOD活性进行Pearson相关性检验,探讨膝关节OA患者CK系统与SOD活性相关性,从而探究CK家族与氧化应激指标SOD的关系。利用KOA组中各参数均值变化趋势探讨各参数在KOA严重等级中的应用价值。
结果:本研究结果显示,与健康对照组人群相比,KOA患者的CK-MM、CK活性显著降低,CK-MM/CK比例降低,分别是CK-MM（t=2.869,P=0.004）P<0.05,CK:（t=2.596,P=0.010）P<0.05,CK-MM/CK:（t=5.900,P=0.000）P<0.001。KOA患者CK-MB活性显著升高,CK-MB/CK比例增加,分别是CK-MB:（t=3.602,P=0.000）P<0.001,CK-MB/CK:（t=5.900,P=0.000）P<0.001。在KOA患者Kellgren-Lawrence（K-L）影像学分级的研究中:较K-L（1-2）级轻度KOA相比,K-L（3-4）级重度KOA患者CK-MM、CK明显减低,CK-MM/CK同样下降,分别是CK-MM:（t=3.569,P=0.001）P<0.05,CK:（t=2.985,P=0.004）P<0.05,CK-MM/CK:（t=4.885,P=0.000）P<0.001。而K-L（3-4）级重度KOA患者CK-MB/CK呈上升趋势（t=4.885,P=0.000）P<0.001。CK-MB则无统计学意义。
与对照组相,KOA病例组SOD活性减低,SOD:（t=8.176,P=0.000）P<0.001,与K-L（1-2）级轻度KOA相比,K-L（3-4）级重度KOA患者SOD明显减低,SOD:（t=5.771,P=0.000）P<0.001。
利用两组数据,在KOA人群中,发现血清SOD与CK-MM、CK、CK-MM/CK呈正相关关系。与CK-MB/CK呈负相关关系,与CK-MB相关性不显著。在KOA组中,CK-MM、CK、CK-MM/CK与SOD在KOA K-L（1-4）级变化趋势相同,其中CK-MM/CK与SOD趋势最为相近,利用以上指标可以有效评价KOA严重程度。
参考文献
[1]Changes in bone mineral density and bone metabolic indexes in ankylosingspondylitis mouse model complicated with osteoporosis[J].Zi-Bing Hu,Bo Wei,Shao-Ke Wu,Jie-Cong Sun,Min Xiang,Zhong-Min Zhang.Experimental and Therapeutic Medicine.2018(2)
[2]Oxidative stress in osteoarthritis and antioxidant effect of polysaccharide from angelica sinensis[J].Chao Zhuang,Yuji Wang,Yunkun Zhang,Nanwei Xu.International Journal of Biological Macromolecule.2018
[3]Creatine kinase（CK）and its association with aggressive behavior in patients with schizophrenia[J].Xian-Dong Meng,Xi Cao,Tao Li,Ji-Ping Li.Schizophrenia Research.2018
[4]Lenalidomide regulates osteocytes fate and related osteoclastogenesis via IL-1β/NF-κB/RANKL signaling[J].Xinhua Qu,Jingtian Mei,Zhifeng Yu,Zanjing Zhai,Han Qiao,Kerong Dai.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2018(2)
[5]李波.肌酸激酶（CK）家族与膝骨关节炎相关性的实验研究[D].天津医科大学,2019.