背景[1-3]
过氧化氢酶活性分析试剂盒提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中过氧化氢酶活性。
过氧化氢酶是一种普遍存在于几乎所有生物体内的一种抗氧化酶，主要分布于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中。它是过氧化物酶体的标志酶,约占过氧化物酶体酶总量的40%。
过氧化氢酶是由四个多肽链组成的同源四聚体，每一个亚基含有超过500个氨基酸残基，且每个亚基的活性位点都含有一个卟啉血红素基团，用于催化过氧化氢的反应。过氧化氢酶的最适pH接近7，最适温度则因物种而异。
过氧化氢酶的主要作用是催化过氧化氢分解为水和氧气，清除体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御体系的关键酶之一，为机体提供了抗氧化防御机理。不同来源的酶有不同的结构，在不同组织中酶的活性水平也不同，过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心脏等器官快，因为肝脏中的CAT含量水平高。
过氧化氢酶活性分析试剂盒
过氧化氢酶活性分析试剂盒利用过氧化氢酶的过氧化物酶活性来进行测定。在合适浓度的H2O2存在的条件下，过氧化氢酶与甲醇反应，产生甲醛，生成的甲醛可以与显色物反应，产物可以在540nm处测量吸光度，样本中的过氧化氢酶活性与OD值成正比。
应用[4][5]
用于生防芽孢杆菌B579微生态效应研究及菌剂制备研究
利用有益微生物控制植物病害的生物防治方法已成为农业可持续发展的重要途径。生物防治的主要方法是在植物根际土壤中施加生防菌,在植物根际定殖后发挥防治和控制土传病害的作用,而枯草芽孢杆菌是常用的生物防治菌种。本研究以枯草芽孢杆菌B579为实验对象,在普通蔬菜作物黄瓜的根际土壤进行处理,通过基因组高通量测序技术和土壤关键酶活性分析,阐明了生防菌的施入对根际微生态效应的影响,并制备生防芽孢杆菌B579粉制剂,为今后B579的大田应用奠定理论基础。
主要研究内容如下:1.B579对黄瓜根际土壤中微生物多样性的影响通过大田试验将枯草芽孢杆菌B579应用于黄瓜根际土壤中。分别采用四种不同的处理方法,即去离子水处理、F.oxysporum处理、B 579处理和B 579+F.oxysporum处理,每种处理各设3个平行实验组。在黄瓜生长周期期间每四周取样一次,共取样四次。使用土壤基因组DNA提取试剂盒提取所获得的黄瓜根际土壤样品的基因组DNA。将高通量测序技术与巢式PCR产物克隆及测序技术相结合,分析黄瓜根际土壤中细菌和真菌微生物群落的多样性变化。
结果表明,与去离子水处理组相比,B579处理组土壤微生物的丰度显著提高,且B579对土壤样品中真菌和细菌的多样性存在不同影响。2.B579对黄瓜根际土壤中关键酶活性的影响为研究在黄瓜根际土壤中施加生防菌B579对土壤关键酶活性的影响,将所取得的土壤样品使用土壤酶试剂盒进行检测。结果表明,生防菌B579的应用显著提高了黄瓜根际土壤中与土壤肥力有关的四种酶活性,即碱性磷酸酶、过氧化氢酶、几丁质酶和脲酶。
同时,发现生防菌B579处理组的酶活性最高,其次是拮抗处理组和去离子水处理组,病原菌处理组的酶活性最低。3.B579粉制剂的制备及其参数检测使用具有低成本、化学性质稳定和强吸附性等优秀性能的硅藻土作为载体,以蔗糖作为抗热保护剂,以枯草芽孢杆菌B579为菌种,用物理方法确定发酵液与硅藻土混合的配比,研制成具有生防功能并兼具营养功能的制剂。所制备粉制剂的有效活菌数为3.0×10111 CFU/g。根据农用微生物粉制剂的制备标准检测粉制剂中技术指标,其中含水量为6.87%,pH值为6.23,细度为94.6%,有效期为7.2个月,各指标均符合要求。
参考文献
[1]Expiration Date Prediction of Biocontrol Agent Prepared with Bacillus subtilis B579 Using the Accelerated Aging Method[J].Yu Zheng,Xiaoyang Jiao,Fang Chen,Xuelian Wang,Min Wang.Polish Journal of Microbiology.2016(4)
[2]Comparative survey of bacterial and archaeal communities in high arsenic shallow aquifers using 454 pyrosequencing and traditional methods[J].Ping Li,Dawei Jiang,Bing Li,Xinyue Dai,Yanhong Wang,Zhou Jiang,Yanxin Wang.Ecotoxicology.2014(10)
[3]The Effect of Biocontrol Bacteria on Rhizosphere Bacterial Communities Analyzed by Plating and PCR-DGGE[J].Fang Chen,Min Wang,Yu Zheng,Shuju Li,Huizhe Wang,Deduo Han,Shangjing Guo.Current Microbiology.2013(2)
[4]Development of soil microbiology methods:from respirometry to molecular approaches[J].Journal of Industrial Microbiology&Biotechnology.2010(12)
[5]闫杨.生防芽孢杆菌B579微生态效应研究及菌剂制备[D].聊城大学,2019.