背景[1-3]
集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒用于检测血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液等相关样本中集落刺激因子(CSF)的活性或浓度。
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被集落刺激因子(CSF)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的集落刺激因子(CSF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒
集落刺激因子(CSF)对体内各种重要生理功能的实现以及疾病的发生进程不可或缺,如造血作用、淋巴组织发育、炎症反应、白细胞迁移、过敏、伤口修复、新血管生成、癌症发生和肿瘤迁移等。
实验步骤：
1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于乳腺疾病患者血浆粒细胞集落刺激因子的检测及其临床意义研究
检测乳腺疾病患者血浆中G-CSF含量,结合相关临床病理资料,探究血浆G-CSF水平与乳腺疾病临床特点的关系,为乳腺良恶性肿瘤的鉴别方法和乳腺癌早期诊断新方法提供证据。
方法:本研究收集了接受手术治疗的202名女性乳腺疾病患者的血浆标本,另收集11例健康体检女性血浆标本。采用细胞因子微球检测技术流式检测血浆G-CSF水平,并收集临床及病理资料,使用SPSS 19.0软件对获得的资料进行统计学分析。
结果:1.样本构成:乳腺癌患者110例,良性乳腺疾病患者92例,健康对照11例。运用Kruskal-Wallis检验,三组血浆G-CSF水平无显著统计学差异（P>0.05）。
2. 乳腺癌患者中,年龄段、肿瘤大小、ER表达情况、PR表达情况、HER-2表达情况、淋巴结转移情况不同者血浆中G-CSF水平无显著统计学差异（P>0.05）。
3. 采用Mann-Whitney检验,Ki-67≥14%的乳腺癌患者血浆G-CSF水平显著高于Ki-67<14%乳腺癌患者的血浆G-CSF水平（P=0.008）。对乳腺癌患者血浆G-CSF浓度值与病理免疫组化Ki-67阳性率的值进行相关性分析,P=0.018,二者显著相关。Spearman相关系数为0.225,故乳腺癌患者血浆G-CSF浓度值与Ki-67阳性率值呈正相关。
4. 采用Kruskal-Wallis检验,四类临床病理分型的乳腺癌患者血浆G-CSF水平存在统计学差异（P=0.035）。进一步两两比较发现,HER-2过表达型乳腺癌患者血浆G-CSF水平显著高于Luminal A型乳腺癌患者血浆G-CSF水平（P=0.034）。再一步比较Luminal A型与HER-2过表达型乳腺癌患者Ki-67阳性率的水平,HER-2过表达型乳腺癌患者Ki-67阳性率水平显著高于Luminal A型（P<0.001）。
结论:1.Ki-67≥14%的乳腺癌患者血浆G-CSF水平显著高于Ki-67<14%乳腺癌患者的血浆G-CSF水平;且G-CSF水平与其病理免疫组化Ki-67阳性率值有显著相关性,呈正相关;提示人血浆G-CSF水平与肿瘤细胞增殖有关,肿瘤细胞增殖较快的人血浆G-CSF水平较高。
2. 不同临床病理分型的乳腺癌患者血浆G-CSF水平存在统计学差异,其中HER-2过表达型乳腺癌患者的血浆G-CSF水平显著高于Luminal A型乳腺癌患者的血浆G-CSF水平;进一步比较发现,HER-2过表达型Ki-67阳性率水平显著高于Luminal A型;提示人血浆G-CSF水平在HER-2过表达型较Luminal A型升高可能与HER-2基因的表达或者肿瘤细胞增殖较快有关,其具体机制有待研究。
3.不同年龄段、肿瘤大小、ER表达情况、PR表达情况、HER-2表达情况、淋巴结转移情况的乳腺癌患者血浆中G-CSF水平无显著统计学差异。
参考文献
[1]High Ki-67 Immunohistochemical Reactivity Correlates With Poor Prognosis in Bladder Carcinoma:A Comprehensive Meta-Analysis with 13,053 Patients Involved[J].Yihuan Luo,Xin Zhang,Meile Mo,Zhong Tan,Lanshan Huang,Hong Zhou,Chunqin Wang,Fanglin Wei,Xiaohui Qiu,Rongquan He,Gang Chen.Medicine.2016(15)
[2]Breast cancer age at diagnosis patterns in four Latin American Populations:A comparison with North American countries[J].Francisco Franco-Marina,Lizbeth López-Carrillo,Nancy L.Keating,Hector Arreola-Ornelas,Felicia Marie Knaul.Cancer Epidemiology.2015(6)
[3]Cancer incidence and mortality worldwide:Sources,methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].Jacques Ferlay,Isabelle Soerjomataram,Rajesh Dikshit,Sultan Eser,Colin Mathers,Marise Rebelo,Donald Maxwell Parkin,David Forman,Freddie Bray.Int.J.Cancer.2015(5)
[4]Global cancer statistics,2012[J].Lindsey A.Torre,Freddie Bray,Rebecca L.Siegel,Jacques Ferlay,Joannie Lortet‐Tieulent,Ahmedin Jemal.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2015(2)
[5]李丽.乳腺疾病患者血浆粒细胞集落刺激因子的检测及其临床意义[D].山东大学,2019.