背景[1-3]
绵羊基质金属蛋白酶1(MMP1)ELISA KIT是利用ELISA（酶联免疫法）来特异性检测样本中基质金属蛋白酶1(MMP1)的含量。
实验原理
绵羊基质金属蛋白酶1(MMP1)elisa试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被绵羊基质金属蛋白酶1(MMP1)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的绵羊基质金属蛋白酶1(MMP1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
绵羊基质金属蛋白酶1(MMP1)ELISA KIT
标本要求
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于辛伐他汀对大鼠动脉钙化血管组织中基质金属蛋白酶表达的影响研究
在使用维生素D3诱导下制备的大鼠动脉钙化模型的基础上，进一步观察辛伐他汀对血管组织中基质金属蛋白酶（MatrixMetalloproteinases MMPs）1和9表达的影响，并探讨其抑制动脉钙化的机制。
方法：选取90只雄性SD大鼠随机分为对照组，钙化组与抑制组，每组30只，钙化组大鼠（30只）实验开始第1天给予维生素D3溶液皮下注射，剂量按照50万U／（kg·day），每天同时间一次性皮下注射，连续三天。同时给予灌胃与抑制组辛伐他汀等量的生理盐水，直至处死之日。抑制组大鼠（30只）同样天给予维生素D3溶液皮下注射，剂量按照50万U／（kg·day），每天同时间一次性皮下注射，连续三天。
同时，给予辛伐他汀灌胃100mg/（kg·day）持续至动物处死之日。对照组大鼠（30只）与钙化组、实验组大鼠同时间给予皮下注射不含维生素D3的溶液（成分除不含维生素D3以外，其它和钙化组、实验组的溶液相同），剂量为与钙化组、实验组相同单位体积量。同时给与灌胃与抑制组辛伐他汀等量的生理盐水，直至处死之日。
用Von Kossa染色法观察大鼠动脉组织钙化程度，使用免疫组织化学法测定大鼠动脉组织中MMP-1和MMP-9的表达，实时荧光定量测定MMP-1和MMP-9mRNA表达。结果：在HE染色中对照组中大鼠动脉组织形态正常，内膜平整光滑，中层平滑肌细胞排列整齐；钙化组可见动脉中层排列紊乱，弹力纤维断裂，有明显泡沫细胞形成；抑制组中可见钙化范围较小，动脉中层弹力纤维破坏不明显。在Von Kossa染色中，对照组组织切片未见有黑色钙盐沉积深染情况；钙化组中可见明显黑色钙盐沉积染色；而辛伐他汀抑制组较钙化组钙盐黑色深染明显减少。
免疫组化法结果：钙化组大鼠动脉组织切片MMP-1和MMP-9表达量较对照组明显升高（MMP-1在周时灰度值：123.78±8.23vs183.75±9.91，P＜0.05；MMP-9在周时灰度值：133.57±11.83vs189.28±11.97，P＜0.05）；抑制组表达量较钙化组明显降低（MMP-1在周时灰度值：139.28±9.18vs123.78±8.23，P＜0.05；MMP-9在周时灰度值：145.39±9.78vs133.57±11.83，P＜0.05）。在RT-PCR的结果中：对照组大鼠动脉组织中MMP-1和MMP-9mRNA表达量均显著低于钙化组（MMP-1：0.0781±0.023vs0.3174±0.056,P＜0.05；MMP-9：0.0582±0.018vs0.2881±0.027，P＜0.05）；而钙化组中上述两项蛋白的mRNA表达量高于抑制组（MMP-1：0.3174±0.056vs0.1872±0.021,P＜0.05；MMP-9：0.2881±0.027vs0.2095±0.019，P＜0.05）。
结论：①MMP-1和MMP-9表达量的增高可能有助于动脉钙化的形成；②辛伐他汀可通过抑制MMP-1和MMP-9的表达进而抑制动脉钙化的形成。
参考文献
[1]Vascular Calcification and Aortic Fibrosis:A Bifunctional Role for Osteopontin in Diabetic Arteriosclerosis[J].Jian-Su Shao,Oscar L.Sierra,Richard Cohen,Robert P.Mecham,Attila Kovacs,James Wang,Kathryn Distelhorst,Abraham Behrmann,Linda R.Halstead,Dwight A.Towler.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2011(8)
[2]Elastin Degradation and Vascular Smooth Muscle Cell Phenotype Change Precede Cell Loss and Arterial Medial Calcification in a Uremic Mouse Model of Chronic Kidney Disease[J].Ashwini Pai,Elizabeth M.Leaf,Mohga El-Abbadi,Cecilia M.Giachelli.The American Journal of Pathology.2011(2)
[3]Effect of Atorvastatin on Haemostasis,Fibrinolysis and Inflammation in Normocholesterolaemic Patients with Coronary Artery Disease[J].Thomas Walter,Sebastian Szabo,Tim Suselbeck,Martin Borggrefe,Siegfried Lang,Stefanie Swoboda,Hans Martin Hoffmeister,Carl-Erik Dempfle.Clinical Drug Investigation.2010(7)
[4]Osteoprotegerin and Progression of Coronary and Aortic Calcifications in Chronic Kidney Disease[J].M.Mesquita,A.Demulder,F.Wolff,C.Mélot,N.Damry,M.Dratwa,P.Bergmann.Transplantation Proceedings.2010(9)
[5]王会雄.辛伐他汀对大鼠动脉钙化血管组织中基质金属蛋白酶表达的影响[D].广西医科大学,2014.