背景[1-3]
动物组织基因组DNA提取试剂盒适用于动物组织、培养细胞、抗凝血液、体液、分泌液等生物样品的DNA提取。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，整个提取过程只需30分钟（不含消化时间）。动物组织基因组DNA提取试剂盒一次可处理1~20mg组织样品、1~200µl抗凝血液或体液样品、5×106个培养细胞，得到的DNA可直接用于PCR、Southern blot、LAMP、Real-Time PCR等下游实验。
实验原理：
动物组织基因组DNA提取试剂盒基于硅胶柱纯化方式。样品在裂解液(Buffer MTL)和蛋白酶作用下裂解消化，DNA释放到裂解液中。加入Buffer AL和乙醇后，转移至柱子中过滤，DNA被吸附上柱子的膜上，而蛋白质则不被吸附而随溶液滤出去除。柱子经Buffer GW1洗涤蛋白质和其它杂质，经Buffer GW2洗涤去除盐分，最后DNA被低盐缓冲液(Buffer AE)洗脱，洗脱的DNA可直接用于PCR、Southern blot、LAMP、Real-Time PCR等下游实验。
动物组织基因组DNA提取试剂盒
DePure硅胶柱是采用高结合力的玻璃纤维滤膜为基质。滤膜在高浓度离子化剂(如盐酸胍或异硫氰酸胍)条件下，可通过氢键和静电等物理作用吸附核酸，而蛋白质或其它杂质不被吸附而去除。吸附了核酸的滤膜经洗涤去除蛋白质和盐，最后可以用低盐缓冲液(Buffer AE)洗脱出滤膜上吸附的核酸。得到的核酸纯度高，可直接用于各种下游实验。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液W2中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1.处理材料：处理量5-25mg（依据不同的组织而定。）推荐处理量为5-10mg.
A．动物组织（脾组织用量应少于10 mg）先打碎处理为细胞悬液，然后10,000 rpm(~11,200×g)离心1分钟，倒尽上清，加250μl缓冲液A，振荡至彻底悬浮。注意：样品过多易堵塞DNA吸附柱。
B．取新鲜或冻存组织样品加入250μl缓冲液A。应用组织匀浆器匀浆，或1.5ml离心管专用研磨杵研磨匀浆。
2.加入10μl蛋白酶K溶液，混匀后在56℃放置，直至组织溶解，无大的组织团块。简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
3.加入250μl缓冲液B，充分颠倒混匀，65℃放置10分钟，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
4.加人250μl无水乙醇，充分涡旋振荡混匀10秒，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中。
6.向吸附柱中加入500μl缓冲液C，12,000 rpm(~13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
7.向吸附柱中加入700μl漂洗液W2（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
8.向吸附柱中加入500μl漂洗液W2，12,000 rpm(~13,400×g)离心30秒，倒掉废液。
9.将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
10.将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加80-200μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心2分钟，将溶液收集到离心管中。
应用[4][5]
用于三个地方品种鸡肌肉组织基因组DNA甲基化分析研究
DNA甲基化水平受到品种、性别、年龄、环境、饲养管理水平等诸多因素的影响，并且在时间和空间上存在差异表达。本研究采用荧光标记的甲基化敏感性扩增多态性技术对汶上芦花鸡9种组织基因组DNA甲基化水平进行了检测，共计检测到19,795个片段，其中非甲基化片段8,935个；半甲基化片段5,668个，全甲基化片段5,192个。
半甲基化比率胸肌显著高于其他组织（P<0.05），全甲基化比率肺脏极显著高于其他组织（P<0.01），甲基化比率胸肌和肺脏显著高于其他组织（P<0.05）。利用所建立的F-MSAP方法检测了汶上芦花鸡、仙居三黄鸡和淮北麻鸡胸肌组织基因组DNA甲基化水平，并与肉质性状进行相关性分析。
半甲基化比率3个品种间差异不显著（P>0.05）；全甲基化比率仙居三黄鸡极显著高于淮北麻鸡，淮北麻鸡又极显著高于汶上芦花鸡（P<0.01）；甲基化比率仙居三黄鸡极显著高于淮北麻鸡和汶上芦花鸡（P<0.01），而淮北麻鸡和汶上芦花鸡差异不显著（P>0.05）。
基因组DNA甲基化水平与肉质性状相关性分析结果表明，甲基化水平与汶上芦花鸡肌纤维密度和剪切力相关性差异极显著（P<0.01），与仙居三黄鸡肌纤维密度和滴水损失相关性差异极显著（P<0.01），与淮北麻鸡滴水损失相关性差异显著（P<0.05），甲基化水平与三个品种的其他肉质性状相关性差异不显著。
最后对甲基化差异基因FABP4mRNA表达水平与汶上芦花鸡肉质性状相关性进行了分析，结果表明甲基化差异基因FABP4mRNA表达水平与汶上芦花鸡剪切力相关性差异显著（P<0.05），而与其它肉质性状相关性差异不显著（P>0.05）。
参考文献
[1]Mechanisms of DNA methylation and demethylation in mammals[J].Ghislain Auclair,Michael Weber.Biochimie.2012(11)
[2]Epigenetics and the Transition from Acute to Chronic Pain[J].Thomas Buchheit,Thomas Van de Ven,Andrew Shaw.Pain Medicine.2012(11)
[3]Distinct DNA methylomes of newborns and centenarians[J].Holger Heyn,Ning Li,Humberto J.Ferreira,Sebastian Moran,David G.Pisano,Antonio Gomez,Javier Diez,Jose V.Sanchez-Mut,Fernando Setien,F.Javier Carmona,Annibale A.Puca,Sergi Sayols,Miguel A.Pujana,Jordi Serra-Musach,Isabel Iglesias-Platas,Francesc Formiga,Agustin F.Fernandez,Mario F.Fraga,Simon C.Heath,Alfonso Valencia,Ivo G.Gut,Jun Wang,Manel Esteller.Proceedings of the National Academy of Sciences.2012(26)
[4]Base-Resolution Analyses of Sequence and Parent-of-Origin Dependent DNA Methylation in the Mouse Genome[J].Wei Xie,Cathy L.Barr,Audrey Kim,Feng Yue,Ah Young Lee,James Eubanks,Emma L.Dempster,Bing Ren.Cell.2012(4)
[5]张永宏.三个地方品种鸡肌肉组织基因组DNA甲基化分析[D].吉林大学,2014.