背景[1][2][3]
单克隆抗体技术起源于Kohler等创建的体外鼠源杂交瘤技术。经多年研究，鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。但鼠单抗的主要缺陷是小鼠免疫系统不能识别某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠单抗的亲和性不如兔来源抗体的亲和性高。
然而由于没有发现兔源性的浆细胞瘤及病毒体外转染兔B细胞的技术困难，直到1995年在c-myc/v-abl转基因兔身上成功地获得了兔浆细胞瘤细胞系，得到了稳定的兔-兔杂交瘤，才使兔单克隆抗体技术有了突破性进展。近年兔单克隆抗体技术日臻完善，目前商品化的兔单抗已达数千种。
Apaf-1是一种分子量为130kD的蛋白质，其存在于细胞质中。人Apaf-1基因位于染色体12q23。Apaf-1 由三部分特殊的结构域组成：①N-末端为85 个氨基酸残基，含有一个半胱氨酸蛋白酶募集域，称为CARD结构域，可结合N端具有同源性的caspase-9。②是和CED-4有很高同源性，含320个氨基酸残基的区域，CED-4同源域内包含一个保守的P环，与dATP/ATP结合，可促进自身的多聚化。③C-末端有12个WD-40重复片段，其阻碍自身多聚化，当它与细胞色素c结合，改变Apaf-1的构象，消除了对Apaf-1自身多聚化的阻碍作用，使Apaf-1与procaspase-9结合并启动其活化过程。
Apaf-1广泛存在于各种组织里，其中以成人脾、外周血白细胞及胚胎脑、肾、肺的表达较高，与这些组织内高水平的凋亡率相一致。现有多种Apaf-1cDNA基因已被证实，包括Apaf-1L，Apaf-1XL，Apaf-1M，Apaf-1XS和Apaf-1 -ALT等。
目前，已发现与最初克隆的Apaf-1cDNA(原始类型)相比，Apaf-1L和Apaf-1XL异构体都具有一个13 W D-40 重复，但Apaf-1XL在CARD和ATPase结构域之间还有一插入序列推断在K562细胞中这种结构可能降低Apaf-1募集caspase-9 前体的能力，从而造成有活性的caspase-9 减少，最终影响caspase-3 的活性。
Apaf-1兔单克隆抗体识别总Apaf-1蛋白质的内源性水平。基于免疫原性肽的氨基酸序列，期望抗体识别所有Apaf-1同种型。p73兔单克隆抗体是通过用对应于人Apaf-1蛋白的残基的合成肽免疫动物而产生的。Apaf-1兔单克隆抗体可用于分子印迹分析。
应用
1. 在生物标记物开发中的应用
兔单克隆抗体包括Apaf-1兔单克隆抗体广泛用于生命科学研究的各个领域，尤其在免疫组织化学以及检测蛋白的转译后修饰方面具有独特优势。至今已有100多种兔单克隆抗体开发用于癌症的IHC临床诊断与研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC诊断试剂盒。在蛋白修饰研究领域，如蛋白的磷酸化，在与疾病相关的蛋白质信号通路中起到了至关重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔单克隆抗体可以非常清楚地显示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多种磷酸化特异性的兔单克隆抗体面世。
2. 在治疗抗体药物开发中的应用
临床使用的大多数治疗用抗体均需经体外亲和力成熟这一步骤，以提高抗体的亲和力。这一过程常需8至12个月，最终亲和力在纳摩尔级(10-9 mol/L)。兔单抗不需使用体外亲和力成熟，就能达到10-11至10-13 mol/L。这种高亲和力不仅减少抗体的临床使用量，还能减少由于使用大量抗体带来的副作用。但这种高亲和力的优势还需在动物和临床试验中进一步证实。
另外，与鼠单抗的人源化相比，兔单克隆抗体的人源化更容易。因为，兔单克隆抗体主要由一种重链及轻链基因构成，通过分析大量的兔单克隆抗体序列发现，兔与人的抗体同源性更高，约60%～76%，而小鼠与人的抗体同源性略低，为57%～72%，说明用兔单克隆抗体开发药物前景更广阔。
主要参考资料
[1] 李婷婷，崔慧斐. 兔单克隆抗体的发展及应用前景[J]. 食品与药品，2012，14(9)： 373-376.
[2] Zou H, Li Y, Liu X, et al. An APAF-1· cytochrome c multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9[J]. Journal of Biological Chemistry, 1999, 274(17): 11549-11556.
[3] 尤程程, 黄利鸣. Apaf-1 研究进展及展望[J]. 广东医学, 2008, 29(4): 686-688.