背景[1-3]
牛3羟基3甲基戊二酰辅酶A合成酶2(线粒体)(HMGCS2)ELISA KIT用于测定人血清、血浆、组织及相关液体样本中牛3羟基3甲基戊二酰辅酶A合成酶2(线粒体)(HMGCS2)的含量或活性。
实验原理：
牛3羟基3甲基戊二酰辅酶A合成酶2(线粒体)(HMGCS2)ELISA KIT是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被3羟基3甲基戊二酰辅酶A合成酶2捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的3羟基3甲基戊二酰辅酶A合成酶2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
牛3羟基3甲基戊二酰辅酶A合成酶2(线粒体)(HMGCS2)ELISA KIT
标本要求
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
操作步骤:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于HMGCS2介导酮体生成并抑制膀胱癌细胞的增殖和转移及其机制的研究
通过权重基因共表达网络（WGCNA）筛选与膀胱癌进展相关的分子标志物目的:采用权重基因共表达网络分析筛选膀胱癌患者基因表达谱与临床病例数据之间的相关性,鉴定与膀胱癌临床特征相关的基因。
方法:从NCBI Gene Expression Omnibus（GEO）公共数据库筛选膀胱癌表达谱芯片,同时获取了TCGA数据库膀胱癌组织（TCGA BLCA）RNA二代测序结果。采用R包limma筛选差异表达基因。采用WGCNA构建无尺度共表达网络,将基因划分为不同的模块,采用Pearson’s相关性计算不同模块与临床特征之间的相关系数,鉴定出与肿瘤临床特征相关性最高的模块（Clinically most related modules）。根据基因显著性（Gene significance）和模块相关性(Module membership,筛选目标模块中的关键基因（hub genes）。
采用非配对T检验（unpaired t-test）检测关键基因在不同临床特征之间的差异,采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）分析关键基因在不同肿瘤分期之间的差异。采用膀胱癌组织芯片来检测关键基因的蛋白水平表达。结果:以FDR<0.05和差异倍数（Fold Change）绝对值≥1.2为筛选阈值,总筛选出873个差异基因。将差异基因作为目标基因进行WGCNA分析,差异基因表达分布符合无尺度网络条件（Scale-free network）,共鉴定出6个共表达模块,yellow模块与病理分期（stage）和侵袭性（Invasion）均具有最高的相关性（cor=0.5,p=4e-07;cor=0.53,p=4e-06）,确定yellow模块为临床感兴趣的模块（Clinically interested module）,又称关键模块（Key module）。
在关键模块中,总共鉴定了19个网络中心基因,进一步通过生存分析、ROC曲线分析以及膀胱癌组织q PCR验证,最终确定HMGCS2与膀胱癌分期和预后相关的关键基因。进一步,利用膀胱癌组织芯片检测HMGCS2蛋白的表达,确定HMGCS2在膀胱癌组织中明显低表达,并且随肿瘤分期越高而表达水平下降。
结论:HMGCS2可能作为鉴别膀胱癌不同的病理分期的生物标志物,以此来预测膀胱癌的疾病进展,这一分子标志物可能对改善膀胱癌患者的风险分层,治疗决策和预后预测具有重要的临床意义。
参考文献
[1]Competitive glucose metabolism as a target to boost bladder cancer immunotherapy.[J].Afonso Julieta,Santos Lúcio L,Longatto-Filho Adhemar,Baltazar Fátima.Nature reviews.Urology.2020(2)
[2]MiR-125b-5p suppresses the bladder cancer progression via targeting HK2 and suppressing PI3K/AKT pathway.[J].Liu Shuo,Chen Qin,Wang Yue.Human cell.2020(1)
[3]HMGCS2 Mediates Ketone Production and Regulates the Proliferation and Metastasis of Hepatocellular Carcinoma[J].Yuan-Hsi Wang,Chao-Lien Liu,Wan-Chun Chiu,Yuh-Ching Twu,Yi-Jen Liao.Cancers.2019(12)
[4]Up-regulated ENO1 promotes the bladder cancer cell growth and proliferation via regulatingβ-catenin.[J].Ji Mingfei,Wang Zhijun,Chen Jie,Gu Liqiong,Chen Ming,Ding Yelei,Liu Tao.Bioscience reports.2019(9)
[5]陈亮.HMGCS2介导酮体生成并抑制膀胱癌细胞的增殖和转移及其机制的研究[D].武汉大学,2020.