背景[1-3]
人乙型肝炎病毒表面抗体(HBSAB)ELISA KIT可以用于检测各种样本中人抗乙型肝炎病毒表面抗体(HBSAB)的含量。
原理：试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
人乙型肝炎病毒表面抗体(HBSAB)ELISA KIT
样品收集、处理及保存方法:
1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
操作步骤:
1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于慢性HBV感染者血清HBsAg、HBsAb共存现象的相关机制研究
探讨HBsAg和HBsAb双阳性的临床意义及慢性HBV感染者血清HBsAg、HBsAb共存现象发生的相关机制。
方法:收集于慢性HBV感染者血清标本并录取相应的临床信息共955例。其中将HBsAg、HBsAb同时阳性的250例为实验组（双阳组）,单纯HBsAg阳性的慢性HBV感染者705例为对照组（单阳组）。分析单、双阳性组患者的血清病毒学和生化学等临床指标的差异。
收集慢性HBV感染者共183例。其中将HBsAg、HBsAb同时阳性且HBV-DNA载量大于或等于103IU/ml的97例为实验组,以HBsAg阳性、HBsAb阴性且HBV-DNA载量大于或等于103IU/ml的慢性HBV感染者86例为对照组。取入组患者的血清,提取血清HBV-DNA,设计引物,PCR扩增BCP区和P区（部分与S区重叠）片段,将PCR产物测序后进行分析,利用Mega6.0和Bioedit7.0对测序结果进行分析。最后利用SPSS21.0对结果进行统计分析,P值均为双侧检验,P<0.05具有统计学差异。比较两组间BCP双突变（A1762T/G1764A双核苷酸替换）及表面抗原“a”决定簇变异及血清病毒学、生化学等临床指标的异同,以探讨HBV慢性感染者血清HBsAg和HBsAb共存现象的可能机制。
结果1.共纳入HBsAg与HBsAb同时阳慢性HBV感染者（双阳组）250例,单纯HBsAg阳性的慢性HBV感染者（单阳组）705例,其年龄和性别在两组间均无统计学差异。2.临床指标分析结果显示,双阳组HBV DNA阳性个体比例高于单阳组,且差异显著（χ2=32.69,P=0.000）;在ALT>40U/L和ALT>80U/L的CHB患者中,双阳组患者均多于单阳组患者（χ2=12.86,P<0.001;χ2=10.78,P=0.001）;两组间的HBeAg阳性率差异无统计学意义（χ2=32.69,P=0.161）。e抗原阳性的两组患者的DNA（lg）差异无统计学意义,但在ALT、AST、TBIL和DBIL四个指标差异均有统计学意义;e抗原阳性患者中,双阳组四个血生化指标均高于单阳组（P=0.0002,0.0003,0.0012,0.0002）。
3.研究共纳入双阳组病例97例,单阳组病例86例,其年龄和性别在两组间均无统计学差异。两组间共发现两个HBV基因型:基因型B和C。双阳组和单阳组的主要基因型均为C基因型,分别占70.1%（66/93）和60.5%（46/76）,差异无统计学意义（χ2=2.71,P=0.1）。4.对C基因型的“a”抗原决定簇变异分析,表明双阳组I126T/N/S的突变率（38.37%）显著高于单阳组（17.39%）,差异有统计学意义（χ2=6.16,P=0.013）。两组（C基因型）1762/1764双突变与I126T/N/S进行联合分析表明,双阳组1762/1764双突变和I126T/N/S联合的发生率高于单阳组,但差异无统计学意义（χ2=3.5,P=0.061）。5.BCP 1762、1764两位点单独分析表明,双阳组位点1762和1764突变频率均显著高于单阳组（χ2=10.18,P=0.001;χ2=11.55,P=0.001）。联合分析提示,双阳组1762/1764双突变率（34.02%,33/97）高于单阳组（15.12%,13/86）,差异有统计学意义（χ2=4.845,P=0.028）。
参考文献
[1]Hepatitis B Virus Core Promoter Double Mutations（A1762T,G1764A）Are Associated with Lower Levels of Serum Dihydrolipoyl Dehydrogenase.[J].Jiang Zhi-Hua,Chen Qin-Yan,Harrison Tim J,Li Guo-Jian,Wang Xue-Yan,Li Hai,Hu Li-Ping,Li Kai-Wen,Yang Qing-Li,Tan Chao,Fang Zhong-Liao.Intervirology.2016(1)
[2]Epidemiological characteristics of the carriers with coexistence of HB sAg and anti‐HB s based on a community cohort study[J].Z.Pu,D.Li,A.Wang,H.Su,Z.Shao,J.Zhang,Z.Ji,J.Gao,B.C.K.Choi,Y.Yan.J Viral Hepat.2016(4)
[3]Biological characteristics of the A1762T/G1764A mutant strain of hepatitis Bvirus in vivo[J].Xiao?Hua Leng,En?Qiang Chen,Ling?Yao Du,Lang Bai,Dao?Ying Gong,Xing Cheng,Fei?Jun Huang,Hong Tang.Molecular Medicine Reports.2015(4)
[4]X protein mutations in hepatitis B virus DNA predict postoperative survival in hepatocellular carcinoma[J].Ying Xie,Shufeng Liu,Yue Zhao,Zhanjun Guo,Jinsheng Xu.Tumor Biology.2014(10)
[5]赖欣.慢性HBV感染者血清HBsAg、HBsAb共存现象的相关机制研究[D].昆明医科大学,2018.