背景[1-3]
人CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中CC趋化因子受体1(CCR1)的含量。
原理:本试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人CCR-1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的CCR-1与单抗结合，加入生物素化的抗人CCR-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，CCR-1浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中CCR-1浓度。
人CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒
准备试剂与收集血样
1.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。血清、血浆作1：2稀释（取100ul，加标本稀释液100ul,稀释2倍）。细胞培养上清可以不做稀释直接检测。
2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释。
4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释。
检测程序
1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3.每孔中加入抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。
8.每孔加入100ul终止液混匀。
9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应CCR-1含量，再乘上稀释倍数即可。
应用[4][5]
用于CCL23-CCR1趋化因子轴在上皮性卵巢癌进展中的作用机制研究
探讨趋化因子轴CCL23-CCR1在人上皮性卵巢癌疾病进展中作用,并为后期研究CCL23-CCR1在上皮性卵巢癌化疗耐药中的机制做前期准备。
方法:首先对6例上皮性卵巢癌组患者及4例正常对照组血清中共441种细胞因子行抗体芯片检测,筛选出56种差异表达蛋白,选取其中一种差异表达蛋白CCL23作为研究对象;其次使用ELISA方法检测22例正常对照组血清及36例上皮性卵巢癌组血清中CCL23浓度;q RT-PCR方法检测CCL23在20例正常对照组和20例上皮性卵巢癌组中的基因表达水平;Western blot方法检测20例正常对照组和20例上皮性卵巢癌组病灶中CCL23蛋白表达水平;免疫组化方法分别对正常对照组,浆液性卵巢瘤及交界性卵巢瘤各20例定量定位检测CCR1蛋白水平表达;同时免疫组化定量定位检测20例I期、20例II期,40例III期、20例IV上皮性卵巢癌原位病灶组织中CCL23及其受体CCR1蛋白水平表达。
结果:抗体芯片对血清中441种细胞因子进行比较,其中正常对照组血清CCL23表达水平（2192.42±264.78）pg/ml;上皮性卵巢癌患者血清CCL23水平（4490.20±206.40）pg/ml,差异具有统计学意义（t=-2.17,P=0.03）;22例成年正常女性血清CCL23表达水平（1157.80±457.40）pg/ml,36例上皮性卵巢癌患者血清CCL23表达水平（1654.90±849.00）pg/ml,差异有统计学意义（t=-2.443,P=0.0188）;上皮性卵巢癌组织CCL23 m RNA表达较正常卵巢组织CCL23 m RNA表达明显增高,差异具有统计学意义（t=-12.95,P<0.001）。
上皮性卵巢癌组CCL23蛋白表达水平较正常对照组CCL23蛋白表达水平明显增高;上皮性卵巢癌原位病灶趋化因子CCL23受体CCR1免疫组化提示:CCR1在正常卵巢生发上皮呈阴性表达,在上皮性卵巢癌组呈阳性或者强阳性表达。而在60例III/IV期上皮性卵巢癌原位病灶中阳性表达的平均光密度值（1.77±0.46）,明显高于40例I-II期卵巢癌的平均光密度值（0.85±0.35）,差异具有统计学意义（t=-4.403,P=0.001）。
结论1、上皮性卵巢癌患者血清及卵巢癌病灶趋化因子CCL23浓度及表达均高于正常对照组。
2、CCL23作用的细胞膜受体CCR1在上皮性卵巢癌中表达明显增强,且III/IV期卵巢癌病灶中CCR1表达高于I/II期,提示趋化因子CCL23可能参与卵巢上皮性卵巢癌的发生发展。
参考文献
[1]PAI-1 secreted from metastatic ovarian cancer cells triggers the tumor-promoting role of the mesothelium in a feedback loop to accelerate peritoneal dissemination[J].Yang Peng,Hiroaki Kajiyama,Hong Yuan,Kae Nakamura,Masato Yoshihara,Akira Yokoi,Kayo Fujikake,Hiroaki Yasui,Nobuhisa Yoshikawa,Shiro Suzuki,Takeshi Senga,Kiyosumi Shibata,Fumitaka Kikkawa.Cancer Letters.2019
[2]Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].Freddie Bray BSc,MSc,PhD,Jacques Ferlay ME,Isabelle Soerjomataram MD,MSc,PhD,Rebecca L.Siegel MPH,Lindsey A.Torre MSPH,Ahmedin Jemal PhD,DVM.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2018(6)
[3]Biomarker potential of IL-6 and VEGF-A in ascitic fluid of epithelial ovarian cancer patients[J].Venus Dalal,Raman Kumar,Sunesh Kumar,Alpana Sharma,Lalit Kumar,Jai Bhagwan Sharma,Kallol Kumar Roy,Neeta Singh,Perumal Vanamail.Clinica Chimica Acta.2018
[4]Ovarian cancer statistics,2018[J].Lindsey A.Torre MSPH,Britton Trabert PhD,MS,MSPH,Carol E.DeSantis MPH,Kimberly D.Miller MPH,Goli Samimi PhD,MPH,Carolyn D.Runowicz MD,Mia M.Gaudet PhD,MSPH,Ahmedin Jemal PhD,DVM,Rebecca L.Siegel MPH.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2018(4)
[5]冯星浩.CCL23-CCR1趋化因子轴在上皮性卵巢癌进展中的作用机制研究[D].安徽医科大学,2020.