背景[1-3]
组织蛋白酶L抗体是一类可以特异性结合组织蛋白酶L的多克隆抗体，主要用于体外检测组织蛋白酶L的WB、Elisa、IP、IF、IHC等免疫学实验。
组织蛋白酶（Cathepsin）都是由无活性的前体酶原(preprocathepsin)水解而成，其在体内的合成途径为：首先在核糖体结合膜上以前体酶原的形式合成，经转铁蛋白先进入内质网，然后进入高尔基体，同时通过糖基化及磷酸化作用形成甘露糖-6-磷酸蛋白，最后通过溶酶体上甘露糖-6-磷酸特异性受体的识别作用，间接转运到溶酶体中。
组织蛋白酶L抗体免疫组化
目前人的组织蛋白酶主要分为两大亚族，一种是组织蛋白酶L类的蛋白酶或称ERW FNIN模体蛋白酶,主要包括组织蛋白酶L(Cat-L，下同)、V、K、S和H；另一种为只包括Cat-B的组织蛋白酶B类蛋白酶。
组织蛋白酶主要存在于溶酶体中，发挥其生理状态下的蛋白水解作用。但在某些特定情况下，胞外也可以检测到它的存在。胞外酶的存在会导致胞外蛋白的水解，多与恶性疾病有关。近年来研究表明组织蛋白酶越来越被认为是在病变、肿瘤入侵、免疫系统相关疾病以及各种寄生虫感染疾病中起作用的。
组织蛋白酶还参与了其他许多疾病的发生。有研究证明在动脉粥硬化的平滑肌等细胞中含有大量的免疫反应性Cathepsin S和Cathepsin K。这两种酶都有很强的弹性蛋白酶活性，它们可能通过降解弹性动脉壁，使得血管壁重建，从而促进动脉粥样硬化过程中动脉斑的形成。另外，人体中组织蛋白酶的异常可会导致许多疾病的发生，如Cathepsin K基因突变或者缺乏会导致固缩骨发育障碍。
应用[4][5]
用于微波场下鲢鱼组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白凝胶特性的影响及机制研究
围绕组织蛋白酶L（Cathepsin L,Cat L）对鱼糜凝胶的劣化作用,研究微波加热对Cat L诱导的肌原纤维蛋白降解及其凝胶特性的影响,并对其影响机制进行初步推测,旨在为更好地使用微波方法改善鱼糜制品的凝胶性能提供一定的理论基础。
主要研究内容及结果如下:（1）鲢鱼背肌Cat L的初步分离和纯化通过研究初步分离过程中酸化处理条件、硫酸铵饱和度和透析袋分子量对粗酶液中Cat L活性的影响,及纯化过程中不同类型离子交换层析柱和离子交换平衡缓冲液p H对蛋白纯化结果的影响,优化Cat L的初步分离和纯化方法。结果选定酸处理条件为p H3.0,40℃温育10 min后回调至p H6.0,硫酸铵饱和度为55%～90%,透析袋分子量为7000 Da。蛋白层析优化方案为弱阴离子交换和分子筛两步层析法,平衡缓冲液选取20 mmol/L、p H6.0磷酸盐缓冲液,最终得到分子量约45 k Da的Cat L组分,纯化倍数为487,回收率为0.022‰。本法可限度去除杂蛋白且操作简便、回收率较高。
（2）微波对Cat L诱导肌原纤维蛋白凝胶劣化的影响通过模拟实际体系中肌原纤维蛋白和Cat L在热诱导凝胶形成过程中的反应,采用等升温曲线的方法控制体系能量的输入。结果表明传统水浴加热条件下Cat L将肌原纤维蛋白降解成小分子肽,破坏蛋白凝胶网络结构,使凝胶网络结构疏松多孔,进而导致肌原纤维蛋白凝胶表观塌缩,凝胶强度降低。微波加酶组的蛋白凝胶强度比水浴加酶组高13.5 g·cm,TCA可溶性肽含量比水浴加酶组低0.7μmol Tyr/g,同时水浴加酶组的SDS-PAGE图谱中有更多低分子量条带,表明微波有效削弱了Cat L对肌原纤维蛋白的降解,进而改善凝胶劣化现象。
（3）微波削弱Cat L诱导的凝胶劣化现象机制讨论通过探究蛋白凝胶形成过程中的水分分布、蛋白二级结构及主要化学作用力的变化,从蛋白质构象变化角度初步探讨微波削弱凝胶劣化的相应机制。结果表明微波通过干预蛋白的构象及空间结构,促进肌原纤维蛋白α-螺旋向其它二级结构的转化,诱导蛋白质聚集使得蛋白分子间疏水相互作用增强,二硫键增多。微波干预蛋白聚集可能进一步降低酶与肌原纤维蛋白活性位点的接触几率,从而阻碍Cat L降解肌原纤维蛋白。综上所述,微波可以有效削弱Cat L对肌原纤维蛋白的降解,进而改善鱼糜凝胶劣化现象。
参考文献
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[2]Identification of a modori-inducing proteinase in the threadfin bream:Molecular cloning,tissue distribution and proteinase leakage from viscera during ice storage[J].Jin-Yang Liu,Asami Yoshida,Yi-Li Gao,Kazuya Shirota,Yasuhiko Shiina,Kiyoshi Osatomi.Food Chemistry.2020(prep)
[3]Low frequency magnetic field plus high pH promote the quality of pork myofibrillar protein gel:A novel study combined with low field NMR and Raman spectroscopy[J].Kun Yang,Yuanhua Zhou,Juanjuan Guo,Xiaolong Feng,Xian Wang,Limei Wang,Jing Ma,Weiqing Sun.Food Chemistry.2020(prep)
[4]Myofibrillar protein conformation enhance gel properties of mixed surimi gels with Nemipterus virgatus and Hypophthalmichthys molitrix[J].Shumin Yi,Qiang Li,Cuiping Qiao,Chang Zhang,Wei Wang,Yongxia Xu,Hongbo Mi,Xuepeng Li,Jianrong Li.Food Hydrocolloids.2020(C)
[5]王谦.微波场下鲢鱼组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白凝胶特性的影响及机制[D].江南大学,2021.