背景[1-3]
小鼠ΑL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中小鼠ΑL岩藻糖苷酶(AFU)的含量。
实验原理:试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠αL岩藻糖苷酶（AFU）水平。用纯化的小鼠αL岩藻糖苷酶（AFU）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入αL岩藻糖苷酶（AFU），再与HRP标记的αL岩藻糖苷酶（AFU）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的αL岩藻糖苷酶（AFU）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠αL岩藻糖苷酶（AFU）浓度。
小鼠ΑL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA试剂盒
操作步骤:
1、取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。
2、分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。10个标准孔,1个空白对照
3、标准品的稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0号标准品。
4、加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒弃去,如此重复5次,拍干。
7、加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。
8、温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9、洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。
10、显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。
11、终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。
12、读板:在450nm波长读取各孔的OD值。
应用[4][5]
用于皂荚提取物对小鼠肝癌细胞TGF-β1信号传导通路的影响研究
探讨皂荚提取物对小鼠肝癌细胞TGF-β1信号通路系统调节的影响,为临床中药抗肿瘤治疗提供实验依据。
方法：本研究取清洁级昆明种小鼠60只,除空白对照组小鼠10只外,其余50只小鼠均予肝癌细胞株H22移植,建立小鼠右上肢皮下移植肿瘤模型,成瘤后50只小鼠被随机分为5组进行灌胃处理,分别为：皂荚提取物组（高剂量组：18.02g/次；中剂量组：9.01g/次；低剂量组：4.505g/次）、金龙胶囊组（阳性对照组：9.01g）、生理盐水组（模型组：9.01ml）上述5组均按剂量给药,每日三次、另空白对照组10只（正常喂养,不做任何处理）。用专用小鼠灌胃针持续灌胃给药15天以后,于第16天处死所有小白鼠,并采取样本（肝脏组织,眼球取血等）,进行肝癌细胞生化学（肝功能,a-L-岩藻糖苷酶（AFU））及分子生物学（TGF-β1表达）等指标检测。
结果：根据实验数据结果进行分析：给药后,皂荚提取物高、中、低各组小鼠与金龙胶囊组小鼠TGF-β1表达阳性率明显高于模型组和空白对照组；皂荚提取物组小鼠AFU和肝功能检测指标降低,与模型组小鼠进行统计学分析比较,有统计学意义（P＜0.05）。
结论：皂荚提取物能降低肝癌小鼠AFU的水平；减轻对肝癌细胞对小鼠肝脏的损害；增强TGF-β1的表达,达到抑制小鼠肝癌细胞的增殖,并促进肝癌细胞的凋亡。
参考文献
[1]Activation of protein kinase C alpha is required for TPA-triggered ERK（MAPK）signaling and growth inhibition of human hepatoma cell HepG2[J].Wu Wen-Sheng,Huang Jun-Ming.Journal of Biomedical Science.2005(2)
[2]Rapid kinetic rate assay of the serumα-l-fucosidase in patients with hepatocellular carcinoma by using a novel substrate[J].Ju-Jun Wang,En-Hua Cao.Clinica Chimica Acta.2004(1)
[3]Involvement of p53,nuclear factorκB and Fas/Fas ligand in induction of apoptosis and cell cycle arrest by saikosaponin d in human hepatoma cell lines[J].Ya-Ling Hsu,Po-Lin Kuo,Lien-Chai Chiang,Chun-Ching Lin.Cancer Letters.2004(2)
[4]Pharmacological evaluation of several major ingredients of Chinese herbal medicines in human hepatoma Hep3B cells[J].C.C.Chou,S.L.Pan,C.M.Teng,J.H.Guh.European Journal of Pharmaceutical Sciences.2003(5)
[5]彭望君.皂荚提取物对小鼠肝癌细胞TGF-β_1信号传导通路的影响[D].湖北中医药大学,2010.