背景[1-3]
人抗IGE受体抗体ELISA KIT用于检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本中人抗IGE受体抗体的含量。
实验原理：人抗IGE受体抗体ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
人抗IGE受体抗体ELISA KIT
操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12) 分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
应用[4][5]
用于慢性特发性荨麻疹相关抗体和B淋巴细胞刺激因子检测及意义研究
探讨抗高亲和力IgE受体（FcεRI）抗体、抗IgE抗体、抗幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）抗体和抗甲状腺球蛋白抗体（Thyroglobulin antibody,TGAb）与慢性特发性荨麻疹（Chronic idiopathic urticaria,CIU）发病的关系。探讨血清中B淋巴细胞刺激因子（B lymphocyte stimulator,BlyS）能否刺激慢性特发性荨麻疹患者B淋巴细胞产生抗FcεRI抗体或抗IgE抗体,导致CIU发病。
方法：研究设CIU患者组、急性荨麻疹（Acute urticaria,AU）患者组和健康对照组,每组300例。每位受试者均进行自体血清皮肤试验（Autologous serum skin test,ASST）,过敏原筛查,检测血清总IgE、抗FcεRI抗体、抗IgE抗体、抗HP抗体、TGAb水平及阳性率,分析以上抗体与CIU发病的相关性。CIU组和健康对照组采用酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）测定血清中BlyS水平,分离并培养外周血B淋巴细胞,在培养液中加入BlyS,ELISA法检测培养液中抗FcεRI抗体和抗IgE抗体水平。分析CIU组与健康对照组血清BlyS水平,抗FcεRI抗体和抗IgE抗体水平的差异,以及CIU患者B淋巴细胞在体外经BlyS刺激后,抗FcεRI抗体和抗IgE抗体与体内检出结果的符合率。
结果：1.CIU组ASST阳性率为53%,AU组为12%,健康对照组未发现阳性者；CIU组和健康对照组过敏原检测均为阴性,而AU组大部分能检测到食物或吸入物过敏原,阳性率为86%；CIU组抗FcεRI抗体和抗IgE抗体水平均高于AU组和健康对照组（p＜0.05）;CIU患者IgE水平低于健康对照组（T=190.00,p＜0.05）,而AU组IgE水平高于健康对照组（T=226.00,p＜0.05）；ASST阳性CIU患者抗FcεRI抗体水平较阴性患者高（T=101.73,p＜0.05）,抗IgE抗体在ASST阳性和阴性CIU患者间无差异（T=312.04,p＞0.05）;CIU组、AU组、和健康对照组抗HP抗体阳性率分别为29%、19%和23%,TGAb阳性率分别为18%、15%和11%,抗HP抗体和TGAb阳性率在三组间比较均无显著差异（p＞0.05）；抗HP抗体阳性的CIU患者中,抗FcεRI抗体阳性率较AU患者和健康人高（p＜0.01）,抗IgE抗体阳性率与AU患者和健康人无差异（p＞0.05）；TGAb阳性的CIU患者中,抗FcεRI抗体阳性率较AU患者和健康人高（p＜0.01）,抗IgE抗体阳性率与AU患者和健康人无差异（p＞0.05）。
2. CIU患者血清BlyS水平显著高于健康对照组（t=3.04,p＜0.01）,抗FcεRI抗体和抗IgE抗体水平也均高于健康对照组（t=3.51,p＜0.01；t=3.29,p＜0.01）,CIU患者的抗FcεRI抗体阳性率显著高于抗IgE抗体（χ2=142.56,p＜0.05）；CIU患者血清中抗FcεRI抗体和抗IgE抗体水平与BlyS水平呈正相关（r=0.99,p＜0.01；r=0.91,p＜0.01）；CIU患者外周血B淋巴细胞培养液中加入有效浓度BlyS后,B淋巴细胞培养液中抗FcεRI抗体和抗IgE抗体水平均显著高于不加BlyS的空白对照（t=3.67,p＜0.01；t=3.56,p＜0.01）,且2种抗体在培养液中的水平也与BlyS浓度呈正相关（r=0.96,p＜0.01；r=0.91,p＜O.01）；抗FcεRI抗体和抗IgE抗体在CIU患者血清与培养液中的检出符合率分别为94.76%和87.84%。
结论：大部分CIU存在抗FcεRI抗体和抗IgE自身抗体,在发病中起主要作用,可界定为自身免疫性荨麻疹,抗HP抗体和TGAb与CIU发病间接相关。CIU患者血液中BlyS水平增高可刺激B淋巴细胞产生抗FcεRI抗体或抗IgE抗体,可能与CIU发病有关。
参考文献
[1]Olopatadine versus levocetirizine in chronic urticaria:an observer-blind,randomized,controlled trial of effectiveness and safety[J].Amrita Sil,Santanu Kumar Tripathi,Anita Chaudhuri,Nilay Kanti Das,Avijit Hazra,Chiranjib Bagchi,Chowdhury Nazrul Islam.Journal of Dermatological Treatment.2013(6)
[2]Comparative study of systemic psoralen and ultraviolet A and narrowband ultraviolet B in treatment of chronic urticaria[J].Naziha Hafez Khafagy,Samar Abdallah M.Salem,Enas Guirguis Ghaly.Photodermatol.Photoimmunol.Photomed..2013(1)
[3]Cold‐induced urticarial vasculitis[J].Alicia Pérez‐Bustillo,Pedro Sánchez‐Sambucety,JoséMaría García‐Ruiz de Morales,Manuelángel Rodríguez‐Prieto.International Journal of Dermatology.2012(7)
[4]Efficacy and safety of omalizumab in patients with chronic urticaria who exhibit IgE against thyroperoxidase[J].The Journal of Allergy and Clinical Immunology.2011(1)
[5]孙丽伟.慢性特发性荨麻疹相关抗体和B淋巴细胞刺激因子检测及意义[D].青岛大学,2013.