背景[1-3]
马血清LONSERA采自健康马血液为原料，封闭系统内无菌采血，微孔过滤而成，性状为澄清液体，无噬菌体、超低内毒素，无溶血无异物无细菌真菌支原体霉形体衣原体等，促细胞生长繁殖效果极佳，适用于细胞、组织器官培养、细胞株保藏、单抗研制。
马血清LONSERA是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
马血清
马血清LONSERA经过多次过滤，去除了许多大分子蛋白，但保留了血清中促细胞生长的活性因子，表现出与胎牛血清和牛血清的类似的特性，因而能用于细胞培养。
马血清可以刺激成纤维细胞分化，以及细胞外基质(ECM)、细胞因子的合成。另外培养神经细胞和心肌细胞、诱导生成树突状细胞等实验均可用马血清替代胎牛血清。
因此，马血清通常适用于那些研究有丝分裂后，细胞关于生长因子和激素等问题的实验。或许，我们可以这样说，从现有研究来看，马血清更适合用来研究特定种类细胞的分化。
应用[4][5]
用于马冠状病毒核蛋白基因片段的表达及其抗体检测试剂盒的研制研究
根据NCBI发表的马冠状病毒（ECV）核衣壳基因序列，设计引物，采用PCR方法扩增出ECV核衣壳基因片段，并构建pGEX-ECV-N，转化宿主菌BL21，经IPTG诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，结果表明42KD的GST-ECV-N融合蛋白在大肠杆菌中获得表达。
将ECV-N从pGEX-ECV-N双酶切下后克隆到杆状病毒转移载体pFastBacl，构建重组转移质粒pFastBac-ECV-N，并转座含有杆状病毒穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，筛选出重组穿梭质粒Bacmid-ECV-N，通过转染Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒rBac-ECV-N。PCR鉴定结果表明ECV-N基因片段已经重组到杆状病毒基因组中。用鼠抗GST-ECV-N多抗对细胞表达的重组蛋白进行间接免疫荧光试验，结果出现亮绿色荧光，证明本研究构建的含有ECV-N基因的重组杆状病毒能够良好表达ECV-N蛋白。
以饱和硫酸铵法提纯马IgG，免疫Balb／c小鼠，经常规方法融合，通过间接ELISA法筛选，结果获得两株抗马IgG的单克隆抗体，分别命名为EQ-IgG-3D10，EQ-IgG-666。单抗生物学特性研究表明：两株单抗均为IgG亚类，有较好的ELISA工作效价，与其他种动物血清均无交叉反应，EQ-IgG-6G6与马IgG有Western-blot反应性。
利用重组病毒rBac-ECV-N感染Sf9昆虫细胞表达出的ECV-N蛋白作为抗原，以抗马IgG单克隆抗体为第二抗体，研制了检测抗ECV-N抗体的ELISA试剂盒。ELISA结果表明，当抗原包被10μg／mL细胞总蛋白，马血清1：100稀释，抗马IgG单克隆抗体用细胞培养上清，检测的特异性，灵敏性。以此组成试剂盒对国内外1064份马血清检测，结果表明中国和澳大利亚马血清存在疑似、阳性血清，而瑞典马血清中没有疑似和阳性血清；中国马血清、澳大利亚马血清、瑞典马血清的阳性率分别是0.98％（即7／711）、6.87％（即23／335）和0（即0／18）。这些结果提示ECV在马群中已存在，必须加以控制。
参考文献
[1]A GENETIC APPROACH TO MAMMALIAN GLYCAN FUNCTION[J].John B.Lowe,Jamey D.Marth.Annual Review of Biochemistry.2003
[2]Developing baculovirus-insect cell expression systems for humanized recombinant glycoprotein production[J].Donald L Jarvis.Virology.2003(1)
[3]Enzyme kinetics and glycan structural characterization of secreted alkaline phosphatase prepared using the baculovirus expression vector system[J].Fuming Zhang,David W.Murhammer,Robert J.Linhardt.Applied Biochemistry and Biotechnology.2002(3)
[4]Determination of Nucleotides and Sugar Nucleotides Involved in Protein Glycosylation by High-Performance Anion-Exchange Chromatography:Sugar Nucleotide Contents in Cultured Insect Cells and Mammalian Cells[J].Noboru Tomiya,Eric Ailor,Shawn M.Lawrence,Michael J.Betenbaugh,Yuan C.Lee.Analytical Biochemistry.2001(1)
[5]孙谦.马冠状病毒核蛋白基因片段的表达及其抗体检测试剂盒的研制[D].扬州大学,2007.