背景[1-3]
人血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中血管舒缓激肽(BK)的含量。
实验原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被血管舒缓激肽(BK)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管舒缓激肽(BK)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
人血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒
样本处理及要求
1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
应用[4][5]
人血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒用于一组新的氨基酸描述子在多肽定量构效关系中的应用研究
收集了AAindex数据库中共计天然氨基酸的566种理化性质参数,并且综合采用近年发展起来的高斯过程回归和随机森林回归以及另外四种更常用的回归方法来建模进行定量构效关系研究。
主要内容是在AAindex数据库中收集了天然氨基酸的566种物理化学性质参数,并收集了苦味二肽、血管收缩素转化酶抑制剂、血管舒缓激肽促进剂、后叶催产素和抗菌肽的多肽序列和实验观测活性值,将天然氨基酸的566种物理化学性质分为疏水性质、立体空间性质、电性质和组成性质四大类,分别并且总体地用matlab软件进行主成分分析,得到一组新的氨基酸描述子H5、S8、E7、C5和V9。用这五种氨基酸描述子分别表征五种多肽样本集,而后按照2:1的比例划分为训练集和测试集。
分别用多元线性回归、偏最小二乘回归、支持向量机回归、最小二乘支持向量机回归、随机森林回归和高斯过程回归6种机器学习的方法进行定量构效关系建模,对建模方法进行比较分析;用留一法进行内部验证以及外部验证,确保模型的有效性。
可以得到一组统计量结果:训练集的拟合系数R~2,均方根误差RMSEE,交叉验证的拟合系数R~2cv,交叉验证的均方根误差RMSCV,测试集的预测相关系数R~2pred,外部交叉验证系数Q~2est,预测的均方根误差RMSEP,从而综合全面地从模型的拟合能力、稳定性以及最为重要的预测能力来评测所建模型的优劣。
发现了几组模型不论是拟合性、稳定性还是预测能力都明显优于前人描述子的搭配组合,E7-BTD-MLR、E7-BTD-PLS、E7-BTD-GP、S8-BTD-GP和V9-ACE-SVM,建模的统计量结果R~2、RMSEE、R~2cv、RMSCV、R~2pred、Q~2est、RMSEP依次为:（1）0.946、0.140、0.796、0.273、0.913、0.915、0.193;
（2）0.946、0.141、0.831、0.249、0.918、0.919、0.188;
（3）0.943、0.145、0.830、0.249、0.929、0.930、0.175;
（4）0.925、0.166、0.736、0.311、0.902、0.903、0.206;
（5）0.903、0.310、0.790、0.457、0.939、0.939、0.243。
将这一组氨基酸描述子应用于苦味二肽、血管收缩素转化酶抑制剂和后叶催产素,都取得了比较好的效果。
（1）C5描述子:对于苦味二肽,用MLR、PLS和GP方法建模取得了比较好的结果;对于血管收缩素转化酶抑制剂,用SVM方法建模的结果很好。
（2）E7描述子:对于苦味二肽,用MLR、PLS和GP方法建模得到了非常好的结果,用SVM和LSSVM方法的建模结果也比较好;对于血管收缩素转化酶抑制剂,用RF方法的建模结果比较好。
（3）H5描述子:对于苦味二肽,用MLR、PLS和GP方法的建模结果比较好;对于血管收缩素转化酶抑制剂,用PLS、GP和SVM方法的建模结果比较好;对于后叶催产素,用GP方法建模得到了非常好的效果,用PLS方法的建模结果也比较好。
参考文献
[1]Intravenous versus intramuscular prophylactic oxytocin for the third stage of labour.[J].Oladapo Olufemi T,Okusanya Babasola O,Abalos Edgardo,Gallos Ioannis D,Papadopoulou Argyro.The Cochrane database of systematic reviews.2020
[2]Identification of potential tumour-associated carbonic anhydrase isozyme IX inhibitors:atom-based 3D-QSAR modelling,pharmacophore-based virtual screening and molecular docking studies.[J].Kumar Avinash,Rathi Ekta,Kini Suvarna G.Journal of biomolecular structure＆dynamics.2020(7)
[3]Quality,availability and storage conditions of oxytocin and misoprostol in Malawi.[J].Nhomsai Hagen,Felix Khuluza,Lutz Heide.BMC Pregnancy and Childbirth.2020(2)
[4]A meta-analysis of the effects of intramuscular and intravenous injection of oxytocin on the third stage of labor.[J].Wu Yu,Wang Huan,Wu Qi-Yan,Liang Xiao-Lei,Wang Jing.Archives of gynecology and obstetrics.2020(3)
[5]吴婷.一组新的氨基酸描述子在多肽定量构效关系中的应用[D].电子科技大学,2021.