背景[1-3]
人异常凝血酶原(APT)ELISA试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中异常凝血酶原(APT)浓度。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用异常凝血酶原(APT)抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(SERPINA3G)会与包被抗体结合，游离的成分被洗去，然后依次加入生物素化的异常凝血酶原(APT)抗体，HRP-链霉亲和素结合物,最后加入单组份TMB底物液。TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，异常凝血酶原(APT)浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中异常凝血酶原(APT)的浓度。
人异常凝血酶原(APT)ELISA试剂盒
标本要求
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
人异常凝血酶原(APT)ELISA 试剂盒用于血清异常凝血酶原Ⅱ在胰腺癌诊断和血管侵犯预测中的价值研究
探讨血清异常凝血酶原Ⅱ（Protein Induced by Vitamin K Absence or Antagonist-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ）在胰腺癌诊断和预测血管侵犯中的价值。
方法:本研究回顾性分析了2017年1月至2020年12月期间149例胰腺癌患者和90例胰腺良性病变患者的临床资料。统计两组患者血清PIVKA-Ⅱ的表达情况,利用受试者工作曲线（Receiver operating characteristic curve,ROC）比较PIVKA-Ⅱ和PIVKA-Ⅱ联合糖类抗原19-9（Carbohydrate antigen19-9,CA19-9）在胰腺癌诊断中的价值。
根据术后病理将149例胰腺癌患者分为血管侵犯组（76例）和未侵犯组（73例）,通过单因素和多因素分析评估血清PIVKA-Ⅱ浓度与胰腺癌血管侵犯的相关性。结果:血清PIVKA-Ⅱ浓度在胰腺癌患者与胰腺良性病变患者中存在显著差异（中位数36mAU/mL vs 23.3mAU/mL,p＜0.001）。
利用ROC曲线分析显示PIVKA-Ⅱ、CA19-9诊断胰腺癌的曲线下面积（Area Under Curve,AUC）分别为0.787（95%置信区间[CI],0.731-0.843,p＜0.001）、0.890（95%CI,0.845-0.934,p＜0.001）,临界值分别为28.895mAU/ml和47.36U/L,PIVKA-Ⅱ诊断胰腺癌的敏感性为65.8%,特异性为83.3%,阳性预测值为86.73%,阴性预测值为59.52%,CA19-9诊断胰腺癌的敏感性为81.2%,特异性为96.7%,阳性预测值为97.58%,阴性预测值为75.65%。
与单独使用相比,PIVKA-Ⅱ联合CA19-9时AUC为0.935（95%CI,0.906-0.966,p＜0.001）,敏感性为83.9%,特异性为95.6%,阳性预测值为96.93%,阴性预测值为78.20%,诊断准确性得到提高。血清PIVKA-Ⅱ可用于CA19-9阴性（＜47.36U/L）人群中胰腺癌的诊断,此时敏感性为60.71%,特异性为86.21%。为排除梗阻性黄疸对PIVKA-Ⅱ浓度的影响,在129例非黄疸患者中进行验证,此时敏感性为63.64%,特异性为79.13%（p＜0.001）。
参考文献
[1]Prognostic nomogram for hepatocellular carcinoma patients after transarterial chemoembolization based on des-γ-carboxy prothrombin reactivity and modified Response Evaluation Criteria in Solid Tumors.[J].Zhao SuMing,Qiu LiWei,Zhao Hui,Gu WeiWei,Yang XiaoHu,Gu ZhuXing,Shi RongFeng,Ni CaiFang.Journal of cancer research and therapeutics.2021(3)
[2]Clinical Value Evaluation of microRNA-324-3p and Other Available Biomarkers in Patients With HBV Infection-Related Hepatocellular Carcinoma.[J].Zhao Li,Yang Qian,Liu Jianbo.Open forum infectious diseases.2021(6)
[3]Anatomical resection is useful for the treatment of primary solitary hepatocellular carcinoma with predicted microscopic vessel invasion and/or intrahepatic metastasis[J].Yukiyasu Okamura,Teiichi Sugiura,Takaaki Ito,Yusuke Yamamoto,Ryo Ashida,Katsuhisa Ohgi,Takeshi Aramaki,Katsuhiko Uesaka.Surgery Today.2021(9)
[4]The diagnostic performance of PIVKA-II in metabolic and viral hepatocellular carcinoma:a pilot study.[J].Basile U,Miele L,Napodano C,Ciasca G,Gulli F,Pocino K,De Matthaeis N,Liguori A,De Magistris A,Marrone G,Biolato M,Marino M,Di Giacinto F,Gasbarrini A,Grieco A,Rapaccini G L.European review for medical and pharmacological sciences.2020(24)
[5]杨洋.血清异常凝血酶原Ⅱ在胰腺癌诊断和血管侵犯预测中的价值研究[D].山东大学,2022.