背景[1][2][3][4]
Phospho-EGFR(Tyr1068)Rabbit Monoclonal Antibody（磷酸化表皮生长因子受体兔单克隆抗体）是用磷酸化的表皮生长因子对兔进行免疫后在其血清中制得单克隆抗体，可用于免疫组化和WE等试验。表皮生长因子受体（EGFR）是一种跨膜蛋白是一个受体的成员表皮生长因子家族（EGF家族）的胞外蛋白的配体。
表皮生长因子受体是ErbB受体家族的成员，是四种密切相关的受体酪氨酸激酶的亚家族：EGFR（ErbB-1），HER2/neu（ErbB-2），Her 3（ErbB-3）和Her 4（ErbB-4）。在许多癌症类型中，影响EGFR表达或活性的突变可导致癌症。人体中EGFR和其他受体酪氨酸激酶的缺乏信号传导与诸如阿尔茨海默病的疾病相关，而过表达与多种肿瘤的发展有关。
通过阻断受体细胞外结构域上的EGFR结合位点或通过抑制细胞内酪氨酸激酶活性来中断EGFR信号传导，可以阻止表达EGFR的肿瘤的生长并改善患者的病情。表皮生长因子受体（EGFR）是一种跨膜蛋白，通过其特异性配体的结合而活化，包括表皮生长因子和转化生长因子α（TGFα）ErbB2没有已知的直接激活配体，并且可能处于活化状态。
组成型或与其他家族成员如EGFR异二聚化后变得活跃。在通过其生长因子配体活化后，EGFR经历从无活性单体形式向活性同源二聚体的转变。尽管有一些证据表明在配体结合之前也可能存在预先形成的无活性二聚体。除了在配体结合后形成同源二聚体之外，EGFR还可以与ErbB受体家族的另一成员（例如ErbB2/Her2/neu）配对，以产生活化的异二聚体。还有证据表明形成了活化的EGFR簇，尽管尚不清楚这种聚集对于活化本身是重要的还是在个体二聚体活化后发生。EGFR二聚化刺激其固有的细胞内蛋白质-酪氨酸激酶活性。
EGFR的C末端结构域中的几个酪氨酸（Y）残基的自磷酸化。这些包括Y992，Y1045，Y1068，Y1148和Y1173，如相邻图所示。这种自身磷酸化通过其自身磷酸化酪氨酸结合的SH2结构域中的几种其他蛋白质引发下游激活和信号传导，这些蛋白质与磷酸化酪氨酸结合。这些下游信号传导蛋白启动几个信号转导级联，主要是MAPK，Akt和JNK途径，导致DNA合成和细胞增殖。这样的蛋白质的表型调节诸如细胞迁移，粘附和增殖。受体的激活对于人皮肤中的先天免疫应答是重要的。EGFR的激酶结构域还可以交叉磷酸化其聚集的其他受体的酪氨酸残基，并且其本身可以以这种方式被激活。
研究应用[5]
Phospho-EGFR(Tyr1068)Rabbit Monoclonal Antibody（磷酸化表皮生长因子受体兔单克隆抗体）用于靶向EGFR抗体融合UL16结合蛋白2激活NK细胞治疗结直肠癌的体内外研究。研究方法通过重叠延伸PCR技术并利用柔性肽G4S将靶向EGFR的抗体(西妥昔单抗)基因与UL16结合蛋白2基因连接起来,建立重组载体,再利用毕赤酵母表达系统进行表达;利用流式细胞仪测定目标融合蛋白对HCT116细胞的结合力;利用MTT法检测目标融合蛋白在体外对HCT116细胞的增殖抑制作用;通过ADCC法测定目标融合蛋白激活NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力。
结果通过基因工程法以及毕赤酵母表达,成功地获得本研究的目标融合蛋白,通过Western blot实验结果表明目标融合蛋白Cetuximab-ULBP正确表达以及成功装配。通过流式细胞仪实验结果表明Cetuximab-ULBP和结直肠癌细胞HCT116的结合率为79.21%,和西妥昔单抗的结合率(73.53%)相当,目标抗体仍然保持了母体抗体结合HCT116细胞的活性。
MTT实验结果表明,西妥昔单抗组和目标融合蛋白组对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,并且呈浓度依赖性。西妥昔单抗组的抑制HCT116细胞增殖率为73.76%,目标融合蛋白组抑制HCT116细胞增殖率为71.98%,两者活性相当,并且增殖抑制作用呈浓度依赖性。目标融合蛋白能显著增强结直肠癌HCT116细胞的杀伤作用。
选用NK92细胞作为效应细胞,当效靶比为100∶1时,西妥昔单抗和目标融合蛋白都能够增强NK92的杀伤HCT116肿瘤细胞的作用,其中目标融合蛋白组的细胞裂解率是(45.34±7.14)%,而西妥昔单抗组的细胞裂解率是(38.24±6.11)%,两者比较,具有统计学差异(P<0.05)。结论与单一西妥昔单抗相比,靶向EGFR抗体融合UL16结合蛋白2通过介导免疫细胞杀伤肿瘤细胞而增强其抗肿瘤活性,在临床上可作为一种结直肠癌治疗的新方法。
参考文献
[1] Herbst RS(2004)."Review of epidermal growth factor receptor biology".International Journal of Radiation Oncology,Biology,Physics.59(2 Suppl):21–6.doi:10.1016/j.ijrobp.2003.11.041.PMID 15142631.
[2] Zhang H,Berezov A,Wang Q,Zhang G,Drebin J,Murali R,Greene MI(August 2007)."ErbB receptors:from oncogenes to targeted cancer treatment".The Journal of Clinical Investigation.117(8):2051–8.doi:10.1172/JCI32278.PMC 1934579.PMID 17671639.
[3] note,a full list of the ligands able to activate EGFR and other members of the ErbB family is given in the ErbB article).
[4] Yarden Y,Schlessinger J(March 1987)."Epidermal growth factor induces rapid,reversible aggregation of the purified epidermal growth factor receptor".Biochemistry.26(5):1443–51.doi:10.1021/bi00379a035.PMID 3494473.
[5] 靶向EGFR抗体融合UL16结合蛋白2激活NK细胞治疗结直肠癌的体内外研究[J].文家治.实用癌症杂志.2018(11)