背景[1]
作为一种新型纳米材料,磁珠能用于检测毒素、病毒、细菌等,也可用于分离特定生物分子。磁性分离技术是以磁性微粒为载体,在外加磁场的定向控制下,利用磁性微粒表面的配体和受体间的特异性亲和作用,可从复杂的原始生物体系中直接分离出目标生物分子,具有简单方便和高选择性的双重优势,为生物分子的快速分离和富集提供一种强有力的手段。
制备[2]
参考 Liu 等的 NHS/EDC 化学偶联方法,将 Tm 的单克隆抗体 2A7H6与磁珠化学偶联。
首先,分别取 A 和 B 两种磁珠 1 mg,用 50 mM MEST 溶液(含 0.05% Tween-20,pH 5.2)洗涤 3 次,分别加入 1.6 μg 的 EDC 和 NHS,混合均匀后室温反应 30 min。
然后用 MEST 洗涤磁珠 3 次,再用 10 m M 硼酸盐缓冲液(简称 BST,含 0.05% Tween-20,pH 9.0)洗涤 2 次,分别加入 25、50、75、100和 125 μg 的 2A7H6抗体,室温混合反应 3 h。反应结束后收集上清液用于偶联量测定。用 BST 洗涤3 次后,加入 500 μL 封闭液(含 1% BSA 的 BST 溶液),室温反应 30 min。
最后,将免疫磁珠重悬在 500 μL 保存液(含 0.05% NaN3和 0.1% BSA 的 BST 溶液)中,4 ℃冷藏备用。
Mag-Beads His-Tag蛋白纯化磁珠
首先,取制备好的免疫磁珠,用 500 μL 20 mM PBS 溶液(pH 7.2)洗涤 3 次后,加入 1 mg Tm富集液反应 30 min,然后回收上清液用于蛋白定量。接着用 500 μL PBS 洗涤磁珠 2 次,加入 500 μL 20 mM 甘氨酸-HCl 缓冲液(pH 2.7)于垂直混合器上反应,洗脱 15 min。在收集洗脱液的离心管中提前加入适量的 Tris-HCl 缓冲液(pH 9.0),使洗脱液 pH 保持中性。洗脱后的免疫磁珠用 MEST 缓冲液洗涤 4 次后重悬在 500 μL 保存液中,4 ℃冷藏保存。
参考文献
[1] 不同磁珠对过敏原蛋白纯化效果的比较研究 .李文娇
[2] Liu Y, Zhang Z, Wang Y, et al. A highly sensitive and flexible magnetic nanoprobe labeled immunochromatographic assay
platform for pathogen Vibrio parahaemolyticus[J].