背景[1-3]
人成骨肉瘤细胞源自14岁患有骨肉瘤的白人男性；聚次黄嘌呤核苷-聚胞嘧啶核苷酸、放线菌酮和放线菌素D可以诱导MG-63细胞产生高水平的干扰素。MG-63细胞表达TGF-β受体Ⅰ和Ⅱ。
人成骨肉瘤细胞
一．人成骨肉瘤细胞培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）人成骨肉瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．人成骨肉瘤细胞处理：
1）冻存人成骨肉瘤细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）人成骨肉瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁人成骨肉瘤细胞传代可以参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）人成骨肉瘤细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
应用[4][5]
人成骨肉瘤细胞可以用于四种抗骨质疏松药物对人血管平滑肌细胞及人成骨肉瘤MG-63细胞内基质Gla蛋白表达的影响
观察四种抗骨质疏松治疗药物(维生素K2、PTH、活性维生素D3、阿伦膦酸盐)对人血管平滑肌细胞及人MG-63细胞基质Gla蛋白，探讨MGP在骨质疏松发病中的可能作用及骨质疏松治疗药物对预防动脉硬化的可能作用。
方法：1.选取人血管平滑肌细胞及经典的具有成骨细胞表型特征的成骨细胞模型人成骨肉瘤MG63细胞进行传代培养。
2. 分别给予不同浓度的维生素K2、PTH、活性维生素D3、阿伦膦酸盐干预培养24h：维生素K2(10-7、10-6、10-5mol/L)，活性维生素D3(10-10、10-9、10-8mol/L)，PTH(10-9、10-8、10-7mol/L)，阿伦膦酸盐(10-6、10-5、10-4mol/L)，每种药物均设立空白对照。
3. 培养24h后抽提血管平滑肌细胞及MG-63细胞总蛋白，采用Western-Blot方法检测血管平滑肌细胞及MG-63细胞中基质Gla蛋白表达的变化。
结果：1.维生素K2、活性维生素D3、PTH、阿伦膦酸盐对人血管平滑肌细胞基质Gla蛋白表达的影响：维生素K2、活性维生素D3、PTH、阿伦膦酸盐均可上调人血管平滑肌细胞基质Gla蛋白的表达，并且随着药物浓度呈梯度增高，MGP蛋白的表达亦明显增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。
2. 维生素K2、PTH、活性维生素D3、阿伦膦酸盐对人成骨肉瘤MG-63细胞基质Gla蛋白表达的影响：维生素K2、活性维生素D3、PTH、阿伦膦酸盐均可上调人成骨肉瘤MG-63细胞基质Gla蛋白的表达，并且随着药物浓度呈梯度增高，MGP蛋白的表达亦明显增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论：Western-Blot技术证实骨质疏松药物可影响人血管平滑肌细胞中MGP的表达，同时证实MGP在人成骨肉瘤MG-63细胞中有表达。骨质疏松治疗药物维生素K2、PTH、活性维生素D3、阿伦膦酸盐均可促进血管平滑肌细胞和MG-63细胞基质Gla蛋白的表达，且呈剂量依赖性。骨质疏松治疗药物可能成为动脉硬化预防和治疗的新研究方向，同时MGP可能成为骨质疏松治疗药物作用的靶点，参与了骨质疏松的发病机制。
参考文献
[1]Matrix Gla protein deficiency causes arteriovenous malformations in mice[J].Yao,Yucheng;Jumabay,Medet;Wang,Anthony;Bostr?m,Kristina I.Journal of Clinical Investigation,2011(8)
[2]Alendronate Induces Mineralization in Mouse Osteoblastic MC3T3-E1 Cells:Regulation of Mineralization-Related Genes[J].Y.Inoue;;I.Hisa;;S.Seino;;H.Kaji.Exp Clin Endocrinol Diabetes,2010
[3]Renal Vascular Lesions:Diagnosis and Endovascular Management[J].A.Rao Chimpiri;;Balasubramani Natarajan.Semin intervent Radiol,2009(03)
[4]Emerging role of bone morphogenetic proteins in angiogenesis[J].Laurent David;;Jean-Jacques Feige;;Sabine Bailly.Cytokine and Growth Factor Reviews,2009(3)
[5]钟文婷.四种抗骨质疏松药物对人血管平滑肌细胞及人成骨肉瘤MG-63细胞内基质Gla蛋白表达的影响[D].南昌大学,2013.