背景及概述[1]
新物种均一化cDNA文库测序中均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库筛选和分析带来障碍的有效措施，有利于研究基因的表达和序列分析。均一化cDNA文库是近年来获得EsT和发现基因的一个新的有效平台。它能够降低文库中高丰度的CDNA，为随机序列和稀有基因的发现提供条件。研究数据表明，绝大多数基因转录产物在单个细胞中的拷贝数有近1-15个，处于中等或低等表达丰度的；但个别高丰度表达基因在单个细胞中的转录产物达500个拷贝左右，大约占总表达量的25%。由基因表达能力引起的巨大差异成为获取具有完整代表性CDNA文库的一个障碍，使大规模研究变得困难。由于高拷贝基因序列的大量存在为功能基因的筛选和鉴定，特别是在大规模的EsT测序中带来大量不必要的浪费。例如，日本1991年启动的水稻基因组计划(RG)PEsT测序中，为获得足够多的基因信息，构建了多达15个独立的CDNA文库，挑取了2900个。DNA克隆测序，才筛选获得近1万条非重复序列。新物种均一化cDNA文库测序能够克服基因转录水平上巨大差异给文库筛选和分析带来的障碍，更便于研究基因的序列分析表达和功能研究。新物种均一化cDNA文库测序中均一化CDNA文库构建的常用方法包括饱和杂交均一化法、寡核昔酸序列指纹均一化法、复性式均一化法和双链特异性核酸酶均一化法。基于双链特异性核酸酶(Duplex-SpecificNuclease，DSN)的先进cDNA文库均一化技术，能减低高丰度表达基因100倍以上，有效富集低丰度表达基因，从而降低冗余率。
主要参考资料
[1] 全长均一化cDNA文库及其应用