枯草芽孢杆菌的制备方法

2023/5/8 8:51:17 作者:谷雨
枯草芽孢杆菌,是芽孢杆菌属的一种细菌,为革兰氏阳性的好氧性菌,普遍存在于土壤及植物体表,在人体亦可发现在肠道内共生的枯草杆菌。型态上的主要特征是菌体表面生有鞭毛,体内形成的内生孢子可抵抗恶劣的外在环境而存活。最近的研究显示,枯草杆菌其实并不全然是好气性的。枯草杆菌在食品和饲料添加剂上广泛使用,如日本人使用该菌的纳豆亚种(var. natto)将黄豆发酵成为纳豆和韩国料理中的清麹酱,近年来使用在种子保护及生物防治上,也经常被拿来应用。临床医学上是属于安全性的有益微生物。 

枯草芽孢杆菌

制备方法

CN1782068A公开一种枯草芽孢杆菌的制备方法,其特征是:

(1)采样:将采样工具及各种采样容器进行灭菌,在豆腐生产工厂附近下水道的淤泥中进行多点采样;

(2)稀释:将采集的样品混合均匀,称取10克样品,溶解于100mL无菌水中,其中装有80-100粒玻璃珠,用力摇动10分钟,静止一分钟,用1mL无菌吸管吸取1mL上清液,移入9mL无菌水试管中,彻底摇匀,然后再从9mL的稀释样中取出1mL样品再移入9mL无菌试管中,彻底摇匀,如此依次进行稀释,直至稀释到10-9;

(3)分离:从上述稀释的样品中用0.1mL无菌吸管分别取出0.1mL样品,移入琼脂平板培养基中,用无菌三角刮棒,涂布均匀,每个稀释度做两个重复,琼脂平板培养基的配方:大豆分离蛋白6.0g、葡萄糖3.0g、氯化钠0.5g、脱脂乳粉4.0g、琼脂粉1.5g、加入1.6%的溴甲酚绿乙醇溶液1mL、pH7.0,121℃灭菌20分钟;

(4)培养:将涂布的平板置于37℃培养箱中倒置培养24小时,观察挑菌;

(5)挑菌:将菌落周围有透明圈的菌落挑入试管斜面中,挑取50个菌落,然后再进行二次分离纯化,最后得到纯培养,从上述50株菌种中选出两株透明圈者,进行紫外线照射诱变;

(6)紫外线诱变初筛:将其中两株菌分别在牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养12小时,取出离心,用无菌水洗涤两次,再用生理盐水稀释,用玻璃珠摇匀打碎,使细胞数达到107,在30W紫外灯下,距离10cm照射6分钟,红光下操作,然后涂布于上述琼脂平板上,避光培养36小时。挑取菌落,移入试管斜面中,挑取50株菌株;

(7)复筛:将50株菌种逐个进行培养、性能测试,从其中筛选出2株性能者,再进行诱变筛选,反复进行3次,最后得到良菌种L-B-05进行菌种鉴定。

应用

一种枯草芽孢杆菌的应用方法,其特征是:

以植物蛋白为原料,原料先进行预处理,加水配制成重量百分比浓度为6-18%,调整PH值为6.0-7.0,然后在121℃高温下进行灭菌处理,冷却至30-35℃,按重量百分比为5.0-10.0%接入培养成熟的枯草芽孢杆菌L-B-05菌种,通入无菌空气,进行搅拌发酵,发酵时保持温度在35℃±2℃,发酵周期为24-48小时;发酵结束在121℃温度下进行高温灭活,先进行过滤分离或精制,浓缩至25-40Bx,喷雾干燥制成产品。

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