背景[1-3]
小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)源自Mo-MuLV诱导的A/Sn小鼠淋巴瘤。细胞对NK细胞的作用敏感，可用于NK细胞活性检测。鼠痘病毒阴性。
小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)
小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)培养步骤：
一、复苏小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
三、小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃
应用[4][5]
小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)可以用于STIP1蛋白参与P2X7受体介导的小鼠淋巴瘤细胞淋巴道转移
为了进一步阐明P2X7R参与淋巴瘤淋巴道转移的机制,在前期实验中,使用沉默了P2X7R的小鼠淋巴瘤细胞P388D1建立淋巴瘤淋巴道转移动物模型,P388D1在小鼠体内成瘤,并发生淋巴道转移。然后采用蛋白质组学手段对转移淋巴结的蛋白质表达情况进行分析,筛选出了STIP1蛋白,发现当P2X7R的表达被抑制后,STIP1也随之显著降低。
为了研究STIP1蛋白是否参与了P2X7R介导的淋巴瘤淋巴道转移过程,我们人为抑制STIP1蛋白在淋巴瘤细胞株中的表达,探讨STIP1蛋白在淋巴瘤淋巴道转移中的作用。方法:首先,采用RT-PCR及Western Blot方法检测小鼠淋巴瘤细胞P388D1和L1210中P2X7R和STIP1表达;其次,使用STIP1干扰慢病毒去感染P388D1和L1210细胞,检测感染效率;再次,采用RT-PCR及Western Blot方法检测P388D1和L1210细胞经过STIP1干扰慢病毒感染后,STIP1蛋白表达的抑制情况;最后,将STIP1表达被抑制的淋巴瘤细胞P388D1和L1210注射到小鼠足垫部位,建立淋巴道转移模型的,观察STIP1的抑制对淋巴瘤转移能力以及对小鼠生存时间的影响。
结果:P2X7R和STIP1在小鼠淋巴瘤细胞P388D1和L1210中表达,STIP1干扰慢病毒可以抑制小鼠淋巴瘤细胞P388D1和L1210中STIP1的表达。STIP1表达被抑制的P388D1和L1210细胞与STIP1未被抑制的细胞相比,其向外周淋巴结转移的能力显著降低,同时当STIP1的表达被抑制后,小鼠的生存明显时间延长。
结论:抑制STIP1可以显著降低淋巴瘤细胞的转移能力,STIP1参与了淋巴瘤淋巴道转移的过程。
参考文献
[1]Expression of P2X7 ATP Receptor Mediating the IL8 and CCL20 Release in Human Periodontal Ligament Stem Cells[J].Oriana Trubiani;;Alberto L.Horenstein;;Francesco Caciagli;;Sergio Caputi;;Fabio Malavasi;;Patrizia Ballerini.J.Cell.Biochem.,2014(6)
[2]Expression and clinical significance of STIP1 in papillary thyroid carcinoma[J].Meng-Hui Yuan;;Run-Suo Zhou;;Bei She;;Hai-Feng Xu;;Jun-Yan Wang;;Long-Xiao Wei.Tumor Biology,2014(3)
[3]Immunohistological analysis of stress-induced phosphoprotein 1 in ovarian cancer patients with low serum cancer antigen 125 levels[J].Angel Chao;;Li-Yu Lee;;Chuen Hsueh;;Chiao-Yun Lin;;Chia-Lung Tsai;;An-Shine Chao;;Chen-Tao Lin;;Hung-Hsueh Chou;;Ting-Chang Chang;;Tzu-Hao Wang.Taiwanese Journal of Obstetrics&Gynecology,2013
[4]Controversies in the Management of Papillary Thyroid Cancer Revisited[J].Marlon A.Guerrero;;Orlo H.Clark;;A.Berner;;A.E.Bilsland;;A.Celetti.ISRN Oncology,2011
[5]姜旭东.STIP1蛋白参与P2X7受体介导的小鼠淋巴瘤细胞淋巴道转移[D].大连医科大学,2015.