背景[1-3]
Liver Parenchymal Cells采用混合酶灌流消化、反复低速离心制备而来，Liver Parenchymal Cells肝实质细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中的消化腺，为一红棕色的V字形器官。
Liver Parenchymal Cells
肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。肝实质细胞是指具有肝功能的单位，是肝脏的基本组成单位之一。肝实质细胞与主要病生理变化：急性肝炎、肝硬化、肝脓肿。肝实质细胞属于中高度分化细胞，生长营养需求高，在体外存活时间短；细胞呈圆形或多角形，核大而圆，居中，常染色质丰富，部分有双核或多倍体核。肝脏作为体内重要的器官，在整个物质代谢过程中具有广泛而多样的作用。
Liver Parenchymal Cells培养操作：
1)复苏Liver Parenchymal Cells：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)Liver Parenchymal Cells传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察HLF-a细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
d、将Liver Parenchymal Cells悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)Liver Parenchymal Cells冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集Liver Parenchymal Cells及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
Liver Parenchymal Cells可以用于肝脏非实质细胞照射对残存肝肿瘤细胞及肝实质细胞放射敏感性的影响研究
部分肝脏非实质细胞的分离培养及细胞因子芯片检测
目的：肝脏非实质细胞经辐射后可释放多种小分子物质,对肝实质细胞放射敏感性及照射后残存肝癌细胞产生影响。分离培养肝非实质细胞,为后续实验研究打下基础。
方法：通过灌洗,消化SD大鼠肝脏,采用密度梯度方法离心分离获得肝非实质细胞,分离到非实质细胞培养后行照射,分别提取上清液(SR和SnonR),行细胞因子芯片检测。
结果：成功分离得到肝脏非实质细胞,分离所得的非实质细胞不表达肝实质细胞所表达的白蛋白,上清液细胞因子芯片结果分析显示：照射后多种炎症相关因子及与转移相关的因子升高。
结论：辐射可以诱导肝脏非实质细胞释放多种细胞因子,可能对肝实质细胞和照射后残存肿瘤细胞产生影响。
第二部分肝脏非实质细胞放疗后上清液对肝癌照射存活后代细胞侵袭转移潜能的影响
目的：观察肝非实质细胞经辐射后培养上清液是否对肝癌照射的残存后代细胞的侵袭转移能力发生影响,并探讨这一作用的可能机制。
材料与方法：大鼠肝非实质细胞原代分离培养后,随机分为照射组及非照射组。照射组细胞经X线一次性照射10Gy。48小时后提取照射组培养上清液(SR)及非照射组上清液(SnonR)加入McA-RH7777肝癌细胞,肝癌细胞也经X线一次性照射10Gy后反复传代8代后,观察它们的侵袭转移能力变化(RH10Gy-SR,RH10Gy-SnonR以及McA-RH7777)。三组细胞分别采用体外transwell小室铺基质胶的侵袭实验及Buffalo大鼠原位种植后观察肺转移结节,来检测它们的转移能力。
结果：体外实验观察,三组细胞侵袭能力RH10Gy-SR>RH10Gy-SnonR>McA-RH7777。三组种入小室的细胞经24小时培养后取出计数,200倍视野下穿出数目分别为40±4.74个,30.6±3.85个和11.4±3.56个。Buffalo大鼠原位种植4周后观察肺转移结节数分别为28.83±5.38,22.17±4.26,8.3±3.8个。ELISA检测到与转移相关的多个因子照射组培养上清液较未照射组上清液增高。结论辐射诱导增强了肝癌残存后代肿瘤细胞转移侵袭能力的提高,并且辐射刺激肝非实质细胞释放的物质促使癌细胞侵袭转移能力进一步增强。照射后与肿瘤转移相关的细胞因子增高可能是促进侵袭转移能力增强的重要因素。
参考文献
[1]Radiation-Induced Liver Fibrosis Is Mitigated by Gene Therapy Inhibiting Transforming Growth Factor-βSignaling in the Rat.Shi-Suo Du;;Ming Qiang;;Zhao-Chong Zeng;;Jian Zhou;;Yun-Shan Tan;;Zheng-Yu Zhang;;Hai-Ying Zeng;;Liu Zhong-Shan.International Journal of Radiation Oncology,Biology,Physics,2010
[2]Inactivation of Kupffer Cells by Gadolinium Chloride Protects Murine Liver From Radiation-Induced Apoptosis.Shi-Suo Du;;Min Qiang;;Zhao-Chong Zeng;;Ai-Wu Ke;;Yuan Ji;;Zheng-Yu Zhang;;Hai-Ying Zeng;;Zhongshan Liu.International Journal of Radiation Oncology,Biology,Physics,2010
[3]Radiation therapy for hepatocellular carcinoma:current status and perspectives from our experience.Wei Jiang;;Zhao-chong Zeng.Oncology Reviews,2009
[4]Regenerative capacity of normal and irradiated liver following partial hepatectomy in rats.Shi-Suo Du;;Zhao-Chong Zeng;;Zhao-You Tang;;Zheng-Yu Zhang;;Liu-Sheng Shi;;Zheng Wu;;Ming Qiang;;Zhong-Shan Liu.International Journal of Radiation Biology,2009
[5]周乐源.肝脏非实质细胞照射对残存肝肿瘤细胞及肝实质细胞放射敏感性的影响[D].复旦大学,2012.