背景[1-3]
人前列腺癌细胞由Horoszewicz JS于1977年从一名50岁的明确诊断为转移性前列腺癌的白人男性患者的左锁骨上淋巴结细针穿刺的活体组织中分离建立的。5-α-双氢睾酮可影响该细胞的生长和酸性磷酸酶的产生。该细胞不形成均一的单层而是成簇生长，所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞；该细胞贴壁不牢，达不到汇合状态，而且会使培养基迅速变酸；传代后48h内一定要保持培养瓶静止.如果此时挪动培养瓶，会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况，需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁，细胞贴壁后可更换培养基。
人前列腺癌细胞
人前列腺癌细胞培养步骤:
一、复苏人前列腺癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、人前列腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁人前列腺癌细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
三、人前列腺癌细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃
应用[4][5]
人前列腺癌细胞可以用于阿伐麦布对人前列腺癌细胞生长迁移的影响及其机制研究
阿伐麦布(Avasimibe)最近被认为是一种具有广大前景的抗癌药物。本研究的主要目的是探讨阿伐麦布在前列腺癌中的作用及其潜在机制。
方法:在这项研究中,进行了MTT和克隆形成存活实验以检测阿伐麦布治疗后的细胞增殖情况。阿伐麦布对细胞迁移的影响通过伤口愈合实验和transwell实验来测量。流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡。免疫荧光染色和蛋白质印迹分析用于检测细胞周期相关蛋白和上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达。在体内,使用异种移植模型和肺转移模型评估阿伐麦布的抗肿瘤作用。
结果:研究发现,阿伐麦布能抑制肿瘤生长并触发细胞发生G1期周期阻滞。此外,阿伐麦布治疗后细胞周期相关蛋白CDK2/4/6、Cyclin D1和Cyclin A1+A2的表达明显降低,p21表达增加。用阿伐麦布处理后前列腺癌细胞的迁移减弱,随后EMT相关蛋白Ncadherin、β-catenin、vimentin、Snail和MMP9的表达下调,E-cadherin表达上调。此外,用阿伐麦布治疗后E2F-1升高。敲低E2F-1表达后,阿伐麦布对细胞增殖和迁移的抑制作用明显回复。
异种移植模型的结果表明,阿伐麦布在体内能抑制肿瘤生长。免疫荧光染色显示,阿伐麦布组肿瘤组织中的Ki67水平低于对照组,E2F-1水平高于对照组。肺转移模型也证实了阿伐麦布对前列腺癌转移的抑制作用。与对照组相比,阿伐麦布组肺转移灶的数量显着减少。
结论:研究结果表明,阿伐麦布可以通过E2F-1信号通路抑制肿瘤的增殖和转移。这些发现证明了阿伐麦布有作为一种新的有效治疗前列腺癌药物的潜力。
参考文献
[1]Enhanced anti-tumor effects of the PD-1 blockade combined with a highly absorptive form of curcumin targeting STAT3..Hayakawa Taeko;Yaguchi Tomonori;Kawakami Yutaka.Cancer science,2020
[2]Genetic Interleukin 6 Signaling Deficiency Attenuates Cardiovascular Risk in Clonal Hematopoiesis..Bick Alexander G;;Pirruccello James P;;Griffin Gabriel K;;Gupta Namrata;;Gabriel Stacey;;Saleheen Danish;;Libby Peter;;Kathiresan Sekar;;Natarajan Pradeep.Circulation,2020
[3]Docetaxel Combined with Thymoquinone Induces Apoptosis in Prostate Cancer Cells via Inhibition of the PI3K/AKT Signaling Pathway.Santosh Kumar Singh;;Tejumola Apata;;Jennifer B.Gordetsky;;Rajesh Singh.Cancers,2019
[4]Current Treatment Options for Metastatic Hormone-Sensitive Prostate Cancer.Carlo Cattrini;;Elena Castro;;Rebeca Lozano;;Elisa Zanardi;;Alessandra Rubagotti;;Francesco Boccardo;;David Olmos.Cancers,2019
[5]熊康平.阿伐麦布对人前列腺癌细胞生长迁移的影响及其机制研究[D].武汉大学,2022.