背景[1-3]
HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞来源于是一个由正常人胰腺导管上皮细胞（HPDE）衍生的永生化上皮细胞系。HPDE6-C7细胞系的科研应用广泛，常用于3D细胞培养的研究。
HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞
HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞培养步骤
1）复苏HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
应用[4-5]
HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞可以用于MLCK在实验性高甘油三脂血症性胰腺炎胰腺导管上皮细胞中作用的初步研究
高脂环境对胰腺导管上皮细胞MLCK及细胞间紧密连接的影响目的:用油酸(oleic acid,OA)和软脂酸(palmitic acid,PA)与HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞共培养,模拟体内的高脂环境,观察在高脂环境下HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞中MLCK,TJ相关蛋白和Ca2+通道mRNA的表达水平变化。
方法:分别用不同浓度的OA(100,200,300,400,500μM/L)和PA(100,200,300,400,500μM/L)处理HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞24h。采用CCK-8法检测细胞增殖;q PCR法检测MLCK、ZO-1、Claudin-2、Occludin、Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1、Cav2.2、Cav3.1、Cav3.2的mRNA表达水平。
结果:1.(1)OA:在浓度为300μM,400μM和500μM时抑制HPDE6增殖,以500μM时抑制最明显(P<0.05)。(2)PA:在浓度为200μM,300μM,400μM和500μM时抑制HPDE6增殖,以500μM时抑制最明显(P<0.05)。
2. (1)OA:在浓度为400μM增加MLCK mRNA表达(P<0.05);浓度为300μM时抑制Occludin mRNA表达(P<0.05);不同浓度OA均抑制ZO-1 mRNA表达(P<0.05),且对Claudin-2 mRNA表达无影响(P>0.05)。(2)PA:增加MLCK mRNA表达,呈浓度依赖性(P<0.05);PA在浓度为200μM时抑制Claudin-2和Occludin mRNA表达(P<0.05);在浓度为100μM-300μM抑制ZO-1 mRNA表达(P<0.05)。
3. (1)OA:浓度在400μM和500μM时增加Cav2.2 mRNA表达(P<0.05);OA浓度在300μM,400μM和500μM时增加Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1、Cav3.1mRNA表达(P<0.05);不同浓度OA对Cav3.2无影响(P>0.05)。(2)PA:浓度在200μM和500μM增加Cav1.2和Cav2.1 mRNA表达(P<0.05);PA浓度在300μM,400μM和500μM时增加Cav2.2和Cav3.2 mRNA表达(P<0.05);PA浓度在200μM,300μM,400μM和500μM时增加Cav1.3和Cav3.1mRNA表达(P<0.05)。
结论:1.OA和PA抑制HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞增殖,以500μM时抑制作用最明显。
2.OA和PA上调HPDE6C7细胞中MLCK及Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1、Cav2.2、Cav3.1 mRNA表达,减少ZO-1、Occludin和Claudin-2 mRNA表达。
参考文献
[1]Hyperlipidemic Acute Pancreatitis and the Apolipoprotein E4 Allele.Annika Charlesworth;;Adrian Steger;;Martin A.Crook.Pancreas,2017
[2]Tight junctions in pulmonary epithelia during lung inflammation..Wittekindt Oliver H.Pflugers Archiv:European journal of physiology,2017
[3]Emergent Triglyceride-lowering Therapy With Early High-volume Hemofiltration Against Low–Molecular-Weight Heparin Combined With Insulin in Hypertriglyceridemic Pancreatitis:A Prospective Randomized Controlled Trial.Wen-hua He;;Min Yu;;Yin Zhu;;Liang Xia;;Pi Liu;;Hao Zeng;;Yong Zhu;;Nong-hua Lv.Journal of Clinical Gastroenterology,2016
[4]Systematic review of hypertriglyceridemia-induced acute pancreatitis:A more virulent etiology?.Rosalie A.Carr;;Benjamin J.Rejowski;;Gregory A.Cote;;Henry A.Pitt;;Nicholas J.Zyromski.Pancreatology,2016
[5]常仁杰.MLCK在实验性高甘油三脂血症性胰腺炎胰腺导管上皮细胞中作用的初步研究[D].广西医科大学,2018.