背景[1-3]
TE-10人食管癌细胞系来源于患有食管鳞癌的58岁男性患者，是一种高度分化的食管鳞状癌，TE-10细胞不能移植到裸鼠体内。TE-10人食管癌细胞源自原位直肠腺癌，和SW620细胞源自同一病人一年后的淋巴结转移。CSAp和直肠抗体3阴性；角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。p53基因第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代，309位密码子的C→T突变导致。
TE-10人食管癌细胞系是一种用于科学研究的细胞系，该细胞系是从人食管癌组织中分离并建立的。TE-10细胞系可用于研究食管癌的发生、发展和治疗方法等方面的研究。
TE-10人食管癌细胞系
该细胞系的特点是其具有稳定的生长特性和明确的生物学特性，能够长期传代培养。TE-10细胞系已被广泛用于食管癌的基础研究和药物筛选等领域。
TE-10人食管癌细胞系是一种来源于人类食管上皮细胞的癌细胞系，其名称为“TE-10”或“Tet-On”食管癌细胞系。这种细胞系最初是在1975年从一名患有晚期食管癌的患者身上分离出来的，随后被广泛应用于研究食管癌的发生、发展和治疗等方面。
TE-10人食管癌细胞系具有以下特点：
1.高度恶性：TE-10人食管癌细胞系是一种高转移性的癌细胞系，能够在不同的组织和器官中形成转移灶。
2.易于培养：与其他类型的癌细胞相比，TE-10人食管癌细胞系更容易从原代培养到传代培养，并且对生长条件的要求相对较低。这使得它们在实验室中的操作相对简单。
3.遗传特性稳定：TE-10人食管癌细胞系的基因组相对稳定，有利于研究基因功能和调控机制。此外，该细胞系的生命周期较短，便于长期观察细胞的生物学行为。
应用[4][5]
TE-10人食管癌细胞系可以用于CLDN-1上调MMP-1的表达促进食管鳞癌细胞TE10侵袭及转移
研究紧密连接蛋白(Claudin-1,CLDN-1)在食管鳞癌细胞TE-10中的生物学功能及机制。
方法:经过在体外培养人食管鳞癌细胞(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)细胞株TE-10人食管癌细胞系,收集在对数生长期的TE-10人食管癌细胞系,种于24孔板。体外构建过表达慢病毒Lv-GFP-Puro-CLDN-1,根据实验需要将TE-10细胞株分为2组。当细胞融合度达到70%-80%时开始感染,按照感染复数(Multiplicity of infection,MOI)=20的比例感染TE-10人食管癌细胞系。过表达组(感染慢病毒Lv-GFP-Puro-CLDN-1),阴性对照组(感染慢病毒空载体)。感染后的TE-10人食管癌细胞系应用嘌呤霉素进行筛选,以获得稳定高表达CLDN-1组的稳定TE-10人食管癌细胞系。通过荧光显微镜和蛋白质印迹(Western-blot)对表达效率进行鉴定。
过表达CLDN-1的TE-10人食管癌细胞系构建成功后采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)分别检测两组TE-10人食管癌细胞系增殖能力发生的变化,采用迁移、侵袭实验(Tanswell)测定两个实验组中肿瘤细胞迁移与侵袭能力的改变。通过mRNA芯片技术分析了CLDN-1过表达组TE-10人食管癌细胞系和相应阴性对照组的mRNA表达谱改变,分析下游靶基因。根据基因芯片分析结果,确定下游的靶基因,运用实时定量聚合酶链反应(Polymeras Chain Reaction PCR)检测下游靶基因mRNA的表达情况。
并通过蛋白质印迹实验检测下游靶基因的蛋白表达水平,同时通过感染慢病毒干扰下游靶基因的表达,进行功能回复实验研究CLDN-1对下游靶基因的表达调控。结果:感染Lv-GFP-Puro-CLDN-1慢病毒载体48 h后,使用荧光显微镜(100×)对GFP的表达情况进行观察显示:视野下TE-10细胞均匀发出绿色荧光,其阳性细胞数在90%以上,感染效率满足实验要求。
Western blot结果显示,与阴性对照相比较,CLDN-1过表达组的CLDN-1蛋白表达(8.13±0.70)明显升高(t=22.95,P<0.05),表明过表达CLDN-1的TE-10细胞构建成功。CCK8实验结果显示:CLDN-1过表达组TE-10细胞在48 h,72 h时的吸光度值分别为(0.71±0.012)和(1.10±0.05),而阴性对照组细胞在48 h,72 h时的吸光度值分别为(0.48±0.03)和(0.76±0.03)。
CLDN-1过表达组TE-10细胞的吸光值明显高于阴性对照组细胞,差异具有统计学意义(P<0.05,48 h:t=5.529,72 h:t=7.829)。这一结果表明:过表达CLDN-1能够促进TE-10细胞的增殖活性。迁移实验结果显示:CLDN-1过表达组的穿膜细胞(54.8±3.4)明显高于阴性对照组(24.6±2.1),差异具有统计学意义(t=9.038,P=0.008,P<0.05);侵袭实验结果显示,CLDN-1过表达组的穿膜细胞数(34.5±2.6)明显高于阴性对照组(11.5±1.6),差异具有统计学意义(t=8.325,P=0.0011,P<0.05)。Tanswell结果说明:通过上调CLDN-1基因的表达可以促进TE-10人食管癌细胞系的迁移和侵袭能力。
信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)芯片分析发现,过表达CLDN-1可以促进食管鳞癌TE-10细胞的基质金属蛋白酶家族(Matrix metalloproteinases,MMPs)基因的表达。芯片分析表明CLDN-1共调控了23个MMPs家族基因的表达,包括:MMP-1,MMP-12,MMP-10等。表达倍数最高的为MMP-1,其基因相对表达水平达到10.25倍,明显上调(P<0.05)。
参考文献
[1]High expression of Claudin-2 in esophageal carcinoma and precancerous lesions is significantly associated with the bile salt receptors VDR and TGR5.Sohaib Abu-Farsakh;;Tongtong Wu;;Amy Lalonde;;Jun Sun;;Zhongren Zhou.BMC Gastroenterology,2017
[2]Association between oral leukoplakia and risk of upper gastrointestinal cancer death:A follow-up study of the Linxian General Population Trial..Liang He;;Yang Zhao;;Wang Jian-Bing;;Yu Pei;;Fan Jin-Hu;;Qiao You-Lin;;Taylor Philip R.Thoracic cancer,2017
[3]Claudin-6 enhances cell invasiveness through claudin-1 in AGS human adenocarcinoma gastric cancer cells.A.C.Torres-Martínez;;J.F.Gallardo-Vera;;A.N.Lara-Holguin;;L.F.Montaño;;E.P.Rendón-Huerta.Experimental Cell Research,2017
[4]The relationship between pathologic nodal disease and residual tumor viability after induction chemotherapy in patients with locally advanced esophageal adenocarcinoma receiving a tri-modality regimen..McNamara Michael J;;Rybicki Lisa A;;Sohal Davendra;;Allende Daniela S;;Videtic Gregory M M;;Rodriguez Cristina P;;Stephans Kevin L;;Murthy Sudish C;;Raja Siva;;Raymond Daniel;;Ives Denise I;;Bodmann Joanna W;;Adelstein David J.Journal of gastrointestinal oncology,2016
[5]曾义波.CLDN-1上调MMP-1的表达促进食管鳞癌细胞TE10侵袭及转移[D].西南医科大学,2018.