背景[1-3]
HELA 229人宫颈癌细胞系是一种来源于人宫颈癌组织的细胞系。这种细胞系具有高度增殖能力和稳定生长特性，常用于宫颈癌的研究和治疗。
在生物学特性方面，HELA 229人宫颈癌细胞系具有上皮细胞的形态和特点，呈梭形或多边形。这种细胞系对紫外线照射敏感，在照射后细胞形态可发生改变。此外，HELA 229人宫颈癌细胞系中存在HPV16型阳性细胞，具有抗脊髓灰质炎病毒和抗7型腺病毒等病毒感染的特性。
在应用方面，HELA 229人宫颈癌细胞系被广泛用于宫颈癌的研究和治疗。这种细胞系可以用于体外药物筛选和疫苗研制，也可以用于研究宫颈癌的发病机制和传播途径。此外，HELA 229人宫颈癌细胞系还可以用于制备抗体和其他生物分子，为生物医学研究提供了重要的工具和资源。
HELA 229人宫颈癌细胞系
HELA 229人宫颈癌细胞系细胞培养操作
1)复苏HELA 229人宫颈癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)HELA 229人宫颈癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)HELA 229人宫颈癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
HELA 229人宫颈癌细胞系可以用于RRAGD在宫颈癌进展中的作用及其功能性研究
RRAGD和MITF在宫颈癌细胞中的表达及意义目的:本课题的研究目的是探讨RRAGD和MITF在宫颈癌细胞系mRNA的表达水平及相互之间的关系,为进一步研究RRAGD和MITF的相关性及其在宫颈癌进展中的生物学功能提供实验依据。
材料和方法:1.建立人原代黑色素细胞系,以人原代黑色素细胞为对照组采用Real time PCR方法检测15株人宫颈癌细胞系的RRAGD和MITF的mRNA表达水平(期间所有标本组织均来自于哈佛大学医学院麻省总医院)。
2. 染色质免疫沉淀(ChIP-seq)法检测人原代黑色素细胞中RRAGD和MITF相关性。
3. 采用Real time PCR方法检测转染转染siRNA-Control、siRNTA-MITF-1和siRNA-MITF-3后HELA 229人宫颈癌细胞系、HeLa、HeLa S3、HeLa229和Hcp2中MITF和RRAGD mRNA的表达水平。
4. 实验数据均采用GraphPad Prism 7软件(GraphPad Software 7,Inc.,La JollalCA,USA)进行数据的统计分析,所有数据用均数±标准差(Mean±SD)表示。采用双侧Student’s t-test或Mann-Whitney’s检验进行两组数据间的比较,以α=0.05作为检验水准。
结果:1.人原代黑色素细胞系的成功建立。
2. RRAGD与MITF在人宫颈癌细胞系中mRNA水平的表达的情况。Real time PCR结果显示,较人正常原代黑色素细胞HR5、X1/5、HeLa、C-4II、HeLaS3、HeLa229、Hep2(HeLa derivative)、HeLa B、Bu25 TK-、HeLa Ohio细胞系RRAGD的mRNA水平表达较高,HtTA-1、HR5-CL11、C-4I、CaSki细胞系RRAGD的mRNA水平表达较低;较人正常原代黑色素细胞HeLa、HeLa S3、HeLa229细胞系MITF的mRNA水平表达较高,HeLa DH、HtTA-1、HR5、X1/5、HR5-CL11、C-4I、C-4 II、CaSki(small bowel metastasis)、Hep2(HeLa derivative)、HeLa B、Bu25 TK-、HeLa Ohio细胞系MITF的mRNA水平表达较低。
3. 人原代黑色素细胞中RRAGD和MITF相关性的分析。(1)MITF ChIP-seq显示MITF占据了原发性人黑素细胞中的RRAGD启动子。(2)H3K27ac ChIP-seq分析显示,si-MITF转染的人原代黑色素系细胞RRAGD启动子区域的H3K27ac水平显着降低。(3)因此,MITF和H3K27ac ChIP-seq表明MITF与RRAGD近端启动子结合并正向调节其在黑素细胞中的转录。
4.转染siRNA-MITF之后MITF和RRAGD在人宫颈癌细胞的表达情况。(1)与阴性对照组相比,转染siRNA-MITF-1和siRNA-MITF-3的实验组在HeLa、HeLa S3、HeLa229和Hep2细胞中MITF mRNA的表达显著降低(P<0.001)。(2)与阴性对照组相比,转染siRNA-MITF-3的实验组HeLa、HeLaS3、HeLa229和Hep2细胞中的RRAGD mRNA的表达显著降低(P<0.001),转染siRNA-MITF-1的实验组在HeLa、HeLa S3和HeLa229细胞中的RRAGD mRNA的表达显著降低(P<0.01)。(3)siRNA-MITF-3较siRNA-MITF-1的转染效率高,且在siRNA-MITF转染效率高于80%的时候,RRAGD的mRNA水平才会明显降低。
参考文献
[1]HIF?1α?induced upregulation of lncRNA UCA1 promotes cell growth in osteosarcomaby inactivating the PTEN/AKT signaling pathway.Tengfei Li;;Yang Xiao;;Tunsheng Huang.Oncology Reports,2018
[2]Recurrent infection progressively disables host protection against intestinal inflammation.Won Ho Yang;;Douglas M.Heithoff;;Peter V.Aziz;;Markus Sperandio;;Victor Nizet;;Michael J.Mahan;;Jamey D.Marth.Science,2017
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[4]Identification and characterization of HPV-independent cervical cancers..Banister Carolyn E;;Liu Changlong;;Pirisi Lucia;;Creek Kim E;;Buckhaults Phillip J.Oncotarget,2017
[5]冯杨.RRAGD在宫颈癌进展中的作用及其功能性研究[D].郑州大学,2020.