背景[1-3]
NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系是一种来源于人肺鳞癌组织的细胞系，通常被用于研究肺鳞癌的生物学特性和治疗策略。这种细胞系具有一些重要的生物学特性，例如上皮细胞样形态、高侵袭性等。此外，NCI-H2170细胞系还可以用于基因表达分析和信号转导研究，以探索肺鳞癌的发生和发展机制。
NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系具有以下特点：
贴壁生长：NCI-H2170细胞系在培养过程中会贴附在培养瓶壁上生长，这是其突出的形态学特征。
肿瘤细胞特性：NCI-H2170细胞系是一种肿瘤细胞系，具有肿瘤细胞的特性，例如增殖能力强、生长速度快、对生长信号的依赖性强等。
侵袭性强：NCI-H2170细胞系的侵袭性较强，容易发生转移和扩散。
基因表达异常：NCI-H2170细胞系的基因表达谱异常，可以用于探索肺鳞癌的发生和发展机制。
NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系
NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备基础培养基(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。
2）NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系细胞处理：
1）复苏NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
应用[4-5]
NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系可以用于转录因子SOX2上调DEK促进肺鳞状细胞癌进展的研究
肺鳞状细胞癌(LSCC)是一种普遍的进行性肺癌亚型。本研究旨在证实SOX2/DEK轴对LSCC发育的调控作用。
研究方法:采购4个LSCC细胞系(LTEP-S、SK-MES-1、NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系、NCI-H520)、1个正常的肺上皮细胞系BEAS-2B用于实验,并临床收集LSCC组织(n=83)和邻近的正常组织,其中采用q RT-PCR和Westernblot检测SOX2的表达。采用Kaplan-Meier分析LSCC-SOX2的表达与患者预后的相关性。采用CCK-8检测方法来检测沉默SOX2对LSCC细胞活力的抑制作用。应用Ch IP检测SOX2与DEK的结合。然后对LSCC细胞进行功能增益和损失分析,应用CCK-8和Transwell实验来检测细胞的活力、迁移和侵袭潜能。
结果:SOX2、DEK在LSCC组织以及NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系等细胞中的表达均上调。SOX2过表达与LSCC患者不良预后正相关。沉默SOX2削弱了LSCC细胞的活力、迁移和侵袭潜能。此外,SOX2可激活DEK的表达,LSCC组织中DEK的表达与SOX2的表达呈正相关,沉默DEK可减弱LSCC细胞的恶性行为。
结论:1.SOX2参与了LSCC的形成,在LSCC组织中高表达,导致LSCC预后不良。
2. 沉默SOX2基因抑制了NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系等细胞的增殖、迁移和侵袭潜能。
3. SOX2激活下游的DEK基因的表达,驱动NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系等细胞的恶性行为和肿瘤生长。
4.沉默DEK基因显著抑制了NCI-H2170人肺鳞癌贴壁细胞系等细胞的活力及迁移、侵袭能力,抑制了LSCC细胞的恶性表型。
参考文献
[1]Correction for:CD36 upregulates DEK transcription and promotes cell migration and invasion via GSK-3β/β-catenin-mediated epithelial-to-mesenchymal transition in gastric cancer..Wang Jin;Wen Ti;Li Zhi;Che Xiaofang;Gong Libao;Jiao Zihan;Qu Xiujuan;Liu Yunpeng.Aging,2022
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[3]miR-148a Regulates the Stem Cell-Like Side Populations Distribution by Affecting the Expression of ACVR1 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma..Tan Yao;Lu Xi;Cheng Zhenzhen;Pan Guangpeng;Liu Shujuan;Apiziaji Palida;Wang Haifeng;Zhang Jinrong;Abulimiti Yisikandaer.OncoTargets and therapy,2020
[4]Next-Generation Sequencing at High Sequencing Depth as a Tool to Study the Evolution of Metastasis Driven by Genetic Change Events of Lung Squamous Cell Carcinoma..Mansour Hicham;Ouhajjou Abdelhak;Bajic Vladimir B;Incitti Roberto.Frontiers in oncology,2020
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