背景[1-7]
人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA KIT是一款利用双抗原夹心法检测人丝裂原活化蛋白激酶激酶6的酶联免疫试剂盒。双抗体夹心法，是将含有已知抗体的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗涤一次；加待测抗原，如两者是特异的，则发生结合，然后把多余抗体洗除；加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体，使形成“夹心”；加入该酶的底物，若看到有色的酶解产物产生，说明在孔壁上存在相应的抗原。
实验原理：用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
操作步骤：
1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2）加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4）加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。
人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA KIT优点：
灵敏度：人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA试剂盒有二层含义，1)为试剂检出被检物质的最低量的能力；2)为试剂对大量样品中阳性检出的能力。
特异性：常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应，使测定结果升高，可能导致假阳性，所以交叉反应是评价其质量的关键指标。
精密度：ELISA试剂一般指其批内CV%，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围。
准确度：通过添加回收实验进行评价。
简便性：人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA试剂盒指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性实验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单。
安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。
经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本，而市场价格比较合理。
操作时注意事项：
1.不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照所用试剂盒严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性。
2.若不同批号人ELISA试剂盒的不同组分(A液或酶工作液)，或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。
3.反应时间的误差，做大量标本时，*孔和zui后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
4.临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。
5.加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。
应用[8]
人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA 试剂盒可用于人丝裂原活化蛋白激酶激酶6的ELISA检测实验：
例如在肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的实验中建立TNFα诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型;使用人胚肾2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen activatedproteinkinasekinase 6,MKK6)及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒;使用人丝裂原活化蛋白激酶激酶6的ELISA法测定法检测细胞内MKK6的激酶活性及表达水平。
参考文献
[1]A tyrosine kinase profile of prostate carcinoma.Robinson D,He F,Pretlow T,et al.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.1996
[2]Opposing effects of ERK and JNK-p38 MAP kinases on apoptosis.Xia Z,Dickens M,Raingeaud J,et al.Science.1995
[3]Role of p38 protein kinase in heatinduced raw cells apoptosis.Zhang L,Zhang L,Jiang Y,et al.Chinese Medical Journal.2000
[4]Mitogen-activated protein kinase:conservation of a three-kinase module from yeast to human.Widmann C,Gibson S,Jarpe MB,et al.Physiological Reviews.1999
[5]Adenovirus technology for gene manipulation and functional studies.Wang Y,Huang S.Drug Discovery Today.2000
[6]Inhibition of extracellular signalregulated kinase enhances ischemia/reoxygenation-induced apoptosis in cultured cardiac myocytes and exaggerates reperfusion injury in isolated perfused heart.Yue TL,Wang C,Gu JL,et al.Circulation Research.2000
[7]Apoptosis signaling pathway in T cells is composed of ICE/Ced-3 family protease and MAP kinase 6b.Huang S,Jiang Y,Li Z,et al.Immunity.1997
[8]刘爱华,邓鹏,姜勇.肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡[J].中华结核和呼吸杂志,2003(02):27-31.