背景[1-3]
安氏毛圆线虫PCR试剂盒是一种用于检测安氏毛圆线虫的生物试剂，采用PCR技术进行检测。该试剂盒可以在短时间内快速、准确地检测出安氏毛圆线虫，对于及时发现和防止疫情扩散具有重要意义。
安氏毛圆线虫是一种常见的寄生虫，可感染人和动物，引起肠道寄生虫病。因此，安氏毛圆线虫PCR试剂盒在寄生虫病防控方面具有重要作用。该试剂盒可用于检测粪便、组织等样本中的安氏毛圆线虫，操作简便、灵敏度高、特异性好。
安氏毛圆线虫
安氏毛圆线虫PCR试剂盒是一种用于检测动物体内是否存在安氏毛圆线虫的PCR(聚合酶链式反应)试剂盒。该试剂盒通常包括以下几个主要组成部分：
模板DNA提取试剂：用于从动物样本中提取出含有目标基因序列的DNA。
PCR反应体系：包括引物、酶、缓冲液等成分，用于扩增目标基因序列。
荧光探针：用于检测PCR反应产物是否存在目标基因序列。
数据分析软件：用于对PCR反应结果进行分析和解读。
使用安氏毛圆线虫PCR试剂盒进行检测时，首先需要从动物样本中提取出含有目标基因序列的DNA，然后将其加入到PCR反应体系中进行扩增。如果目标基因序列存在，荧光探针会与PCR反应产物结合并发出荧光信号，从而表明目标基因序列存在。最后，可以使用数据分析软件对PCR反应结果进行分析和解读，以确定动物是否感染了安氏毛圆线虫。
应用[4-5]
安氏毛圆线虫PCR试剂盒可以用于羊捻转血矛线虫ITS基因序列分析及其虫卵PCR检测方法的建立
研究拟采用安氏毛圆线虫PCR试剂盒PCR技术,对陕西地区捻转血矛线虫分离株的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因序列进行扩增、测序和分析,以了解ITS基因的遗传变异情况;根据捻转血矛线虫ITS2基因特点,设计特异性引物并对退火温度进行优化建立粪便虫卵PCR检测方法,将所建立PCR应用于临床奶山羊粪便样品中捻转血矛线虫卵的检测,并与粪便镜检结果进行对比,获得以下结果:
1. 对采自陕西咸阳地区不同年份的44株捻转血矛线虫分离株,进行ITS基因位点的扩增、测序和分析。结果显示,捻转血矛线虫ITS1的长度为400或404 bp、种内变异率为0.0～3.6%,共27个类型,将其与参考序列比对发现存在16个碱基突变位点,ITS2的长度为231bp,种内变异率为0.0～6.9%,共20个基因类型,与参考序列比对发现共15个碱基突变位点。结果表明,陕西咸阳地区2015—2020年之间的羊捻转血矛线虫的ITS rDNA序列的种内变异率较小,且尚未出现种群的分化。种系发育进化树结果显示各国的分离株进化关系较近,且同一地区的不同分离株未汇聚在同一枝,初步分析表明,捻转血矛线虫的ITS基因的变异情况与不同的地理条件之间的相关性不明显,世界各地的捻转血矛线虫分离株之间存在较高的基因相似度。
2.基于安氏毛圆线虫PCR试剂盒和特异性引物对(Hc.F、Hc.R)建立的PCR检测方法的特异性良好,能将捻转血矛线虫卵同其他常见线虫卵(细颈线虫、似血矛线虫、兰式毛尾线虫、尖尾线虫、网尾线虫、夏伯特线虫、蛇形毛圆线虫、粗纹食道口线虫、绵羊毛尾线虫等)特异性区分。PCR反应的最佳退火温度为53℃。在DNA模板含量较低(0.298 pg)时,仍能检出,表明其具有较高的灵敏性。85份奶山羊粪便样品,经粪便镜检共检出23份捻转血矛线虫阳性粪样(27.06%,23/85),利用特异性PCR镜检共检出38份捻转血矛线虫阳性粪样(44.71%,38/85),且镜检和PCR方法诊断结果一致性一般(Kappa=0.530)。
参考文献
[1]Prevalence and seasonal variation of gastrointestinal nematodes and coccidia infecting ovine grazing on communal rangelands in the Eastern Cape,South Africa.Mlungisi S.Jansen;Nkululeko Nyangiwe;Mandla Yawa;Mzwethu Dastile;Vuyiswa Mabhece;Voster Muchenje;Thando C.Mpendulo.Parasitology Research,2020
[2]Helminth infections of great concern among cattle in Nigeria:Insight to its prevalence,species diversity,patterns of infections and risk factors..Ola-Fadunsin Shola David;;Ganiyu Isau Aremu;;Rabiu Musa;;Hussain Karimat;;Sanda Idiat Modupe;;Baba Alhassan Yunusa;;Furo Nathan Ahmadu;;Balogun Rashidat Bolanle.Veterinary world,2020
[3]Vulvar flap morphology of Haemonchus contortus in naturally infected slaughtered goats in Northern area of Bangladesh.Nahar L.;Sarder M.J.U.;Rahman M.;Begum M.I.A.;Rahman S..Bangladesh Journal of Veterinary Medicine,2020
[4]Development and field evaluation of a species-specific mt-COI targeted SYBR-Green Real Time PCR for detection and quantification of Haemonchus contortus in cattle in Turkey.Onder Duzlu;;Alparslan Yildirim;;Gamze Yetismis;;Zuhal Onder;;Emrah Simsek;;Arif Ciloglu;;Gozde Sahingoz Demirpolat;;Abdullah Inci.Veterinary Parasitology,2020
[5]邹敏.羊捻转血矛线虫ITS基因序列分析及其虫卵PCR检测方法的建立[D].西北农林科技大学,2022.