背景[1-3]
兽疫链球菌PCR试剂盒是一种用于检测兽疫链球菌的生物试剂，采用荧光PCR法，具有高灵敏度。
兽疫链球菌PCR试剂盒是一种用于检测动物体内是否存在兽疫链球菌的PCR(聚合酶链式反应)试剂盒。该试剂盒通常包括以下几个主要组成部分：
模板DNA提取试剂：用于从动物样本中提取出含有目标基因序列的DNA。
PCR反应体系：包括引物、酶、缓冲液等成分，用于扩增目标基因序列。
荧光探针：用于检测PCR反应产物是否存在目标基因序列。
数据分析软件：用于对PCR反应结果进行分析和解读。
兽疫链球菌PCR试剂盒
使用兽疫链球菌PCR试剂盒进行检测时，首先需要从动物样本中提取出含有目标基因序列的DNA，然后将其加入到PCR反应体系中进行扩增。如果目标基因序列存在，荧光探针会与PCR反应产物结合并发出荧光信号，从而表明目标基因序列存在。最后，可以使用数据分析软件对PCR反应结果进行分析和解读，以确定动物是否感染了兽疫链球菌。
兽疫链球菌是一种革兰氏阳性菌，可引起动物疾病，因此兽疫链球菌PCR试剂盒在动物疾病防控方面具有重要作用。该试剂盒可在短时间内快速、准确地检测出兽疫链球菌，对于及时发现和防止疫情扩散具有重要意义。
兽疫链球菌PCR试剂盒的操作步骤如下：
1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。
2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。
3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。
4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。
5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在兽疫链球菌的感染。
应用[4-5]
兽疫链球菌PCR试剂盒可以用于奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定及其多克隆抗体的制备
实验从广西6个规模化奶牛场共采集患乳房炎的奶样75份,通过传统的病原微生物学、革兰氏染色与镜检、兽疫链球菌PCR试剂盒PCR法以及生化实验等方法对乳房炎奶样中链球菌进行分离鉴定,并对感染链球菌的乳房炎的发生情况作了初步统计分析。随机抽取临床鉴定的链球菌菌株14株进行小白鼠攻毒实验,以不同浓度链球菌分3组分别攻毒14只昆明系小白鼠,另选6只小白鼠注射生理盐水为对照组,饲喂3d观察小白鼠的发病情况,并进行链球菌致病力的分析。用大黄、黄连、黄岑、五味子、金银花等11种中药进行单味药的药敏实验,同时用牛场提供的16种药物以药敏纸片法测定其抑菌直径。选取致病力强的链球菌菌株2株作为颗粒性抗原,多次免疫大白兔、大鼠各一只,将获取的抗血清经饱和硫酸铵进行抗体蛋白纯化,再通过间接ELISA和SDS-PAGE电泳对抗血清的效价和特异性进行检测。
本研究的结果如下：1、采集的75份奶样中共分离病原菌328株。(1)革兰染色镜检,328株菌株中,有160株为链球菌,占总菌株比率的48.78%。其中F牛场乳房炎链球菌感染最为严重,感染率高达90.48%,其次为A和C牛场,感染率分别为51.24%、51.85%,其余牛场的感染率均在40-50%之间。(2)菌液兽疫链球菌PCR试剂盒PCR鉴定,160株中有152株被鉴定为阳性,占分离总菌株数的46.34%。
2、用链球菌对小白鼠进行攻毒实验,发现该菌对小白鼠的半数致死浓度为2.04×108cfu/mL。其药敏实验的结果为：牛场的部分药物对链球菌有一定的抑制作用,链球菌对抗生素氨苄西林钠和阿莫健极敏；对中药中的大黄、黄芩、黄连3种药物极敏,而对甘草、金银花、鱼腥草、川芎等几乎无反应。
3、通过间接ELISA对多克隆抗体效价测定,大白兔、大鼠的最高抗体效价分别为1:819200、1:512000,抗血清分别纯化两次,通过核酸分析仪测定结果分别为14.29μg/mL、11.44μg/mL。抗血清通过SDS-PAGE垂直电泳检测,可见特异性及纯度较高的抗体条带,其分子量分别约为55KD、25KD,与理论分子量大小相符。用间接ELISA法检测白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等其它菌株均无交叉反应现象。
参考文献
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[5]侯小露.奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定及其多克隆抗体的制备[D].广西大学,2014.