背景[1-3]
NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系是一种常用的细胞系，用于研究肺癌的生物学特性和药物筛选。这种细胞系源自一名女性的肺转移癌组织，具有非小细胞肺癌的典型特征。
NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系通常在含有优质胎牛血清、抗生素和生长因子的RPMI-1640培养基中生长。该细胞系是贴壁生长的，需要在塑料培养容器中培养。
NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系是一种重要的科研工具，可以帮助我们更好地了解肺癌的生物学特性和药物筛选等方面的知识。在使用时，需要严格按照细胞的生长特性和操作要求进行培养和处理，以保证实验结果的准确性和可靠性。
NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系
NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞培养操作
1)复苏NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于ERCC1表达和p53突变状态联合预测HDACi增敏非小细胞肺癌中顺铂疗效
非小细胞肺癌细胞株对顺铂及顺铂和Panobinostat联合用药的敏感性目的：在8个NSCLC细胞株中,检测各个细胞株对顺铂以及顺铂和Panobinostat联合用药的敏感性。
方法：在8个NSCLC细胞株中,首先通过qPCR和Western检测ERCC1在各细胞株中的表达水平,然后分别用顺铂和顺铂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Panobinostat)处理,通过对细胞生长的测量观察不同细胞株对顺铂以及联合用药的敏感性。
结果：在8个NSCLC细胞株中,我们检测到在细胞株A549,HCC827,NCI-H23,NCI-H441和NCI-H1975中,ERCC1匀为低表达；而在另外三个细胞株NCI-H1299,NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系和PC-14中,ERCC1为高表达。8个细胞株中,除了A549以外的7个细胞株均对顺铂耐药,与ERCC1的表达水平没有显著的相关性；而当顺铂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂Panobinostat和顺铂联用时,5个ERCC1低表达的细胞株中,4个细胞株均对联合用药敏感性显著增高,而3个ERCC1高表达细胞株对联合用药仍表现为不敏感。
结论：ERCC1的表达水平对于NSCLC细胞株对顺铂单药的敏感性的预测并不明显；Panobinostat可以增加ERCC1低表达NSCLC细胞株对顺铂的敏感性。
ERCC1表达水平和p53状态对顺铂和Panobinostat联合用药疗效的预测作用目的：研究NSCLC细胞株中ERCC1表达水平和p53状态对顺铂和Panobinostat联合用药的预测性。
方法：在ERCC1高表达的细胞株中进行ERCC1的敲低(Knockdown,KD)实验,同时选取2个ERCC1低表达细胞株进行ERCC1的过表达来验证ERCC1对顺铂和Panobinostat联合用药的预测性。通过敲低功能获得型(Gain of function,GOF)突变的p53,以及在p53缺失的细胞株中过表达野生型及GOF p53来验证p53状态对顺铂和Panobinostat联合用药的预测作用。最后在PC-14细胞株中,同时敲低ERCC1及GOF p53,观察细胞对顺铂和Panobinostat联合用药的敏感性的变化结果：在ERCC1高表达的细胞株NCI-H1299,NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系和PC-14中,敲低ERCC1可以增加NCI-H1299和NCI-H2172细胞株对顺铂和Panobinostat联合用药的敏感性。而在ERCC1低表达的细胞株HCC827和NCI-H23中,过表达ERCC1可以降低细胞对联合用药的敏感性。
在携带GOF突变p53的细胞株NCI-H1975中敲低p53,在携带GOF突变p53和ERCC1高表达的PC-14细胞株中同时敲低ERCC1和p53可以增加细胞对联合用药的敏感性,而在野生型p53细胞株A549和HCC827中,则未观察到该现象；相反的,我们在p53缺失的细胞株NCI-H2172人非小细胞肺癌贴壁细胞系中,过表达野生型p53可以增加细胞对联合用药的敏感性,而过表达GOF突变p53则可以逆转该细胞中ERCC1敲低时细胞对联合用药敏感性的增加。结论：同时检测ERCC1的表达水平和p53突变状态可以预测NSCLC细胞株对顺铂和Panobinostat联合用药的敏感性。
参考文献
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[5]蔡飏.ERCC1表达和p53突变状态联合预测HDACi增敏非小细胞肺癌中顺铂疗效[D].中国人民解放军医学院,2016.