背景[1-7]
TRAM-34(Potassium Channel抑制剂)是一种有效的，选择性的中电导Ca2+-activated K+channel(IKCa1，KCa3.1)(钙激活的K+通道)抑制剂，Kd为20nM，比作用于其他离子通道选择性高200到1500倍，且不抑制细胞色素P450。在体外研究中与Clotrimazole不同，TRAM-34选择性抑制IKCa1而不会阻断细胞色素P450酶(CYP3A4)。
TRAM-34有效抑制IKCa1转染的COS-7细胞中克隆的IKCa1通道，也抑制人类T淋巴细胞和T84细胞中的IKCad电流，Kd分别为20nM、25nM和22nM，比Clotrimazole更有效，Kd分别为70nM、100nM和90nM。TRAM-34比其他离子通道，如Kv、BKCad、SKCad、Na+、CRAC和Cl-通道选择性高200到1500倍。TRAM-34显著抑制anti-CD3抗体或PKC激活剂PMA和钙离子载体离子霉素诱导的人类T淋巴细胞激活，IC50分别为295-910nM和85-830nM。TRAM-34(5μM)不会抑制人类T淋巴细胞或一些细胞系的细胞活力。
TRAM-34显著抑制EGF诱导的IKCa1上调和EGF刺激的A7r5增殖，IC50为8nM。TRAM-34处理抑制人类子宫内膜癌(EC)细胞增殖，且阻断EC细胞周期，使其停在G0/G1期。TRAM-34(1-30μM)抑制IKCa1通道，导致LNCaP和PC-3前列腺癌(PCa)细胞增殖受抑制，而不会导致凋亡，这种作用存在剂量依赖性，涉及p21Cip1提高和细胞周期停滞在G1期。
在体内研究中TRAM-34按通道阻断剂量(0.5mg/kg/day)500-1000倍处理小鼠7天，没有毒性。TRAM-34每天按120mg/kg剂量处理球囊导管损伤(BCI)的大鼠模型，显著降低内膜增殖，降低~40%。与体外抑制EC细胞增殖的效果相一致，在体内TRAM-34按30μM处理减慢HEC-1-A肿瘤的进展。
应用[8]
TRAM-34(Potassium Channel抑制剂)可用于白血病细胞株的细胞学研究：
在TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响实验中TRAM-34可抑制HL-60细胞的增殖及侵袭能力,同时可诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,且TRAM-34作用的时间和浓度均对HL-60细胞恶性行为有影响。
TRAM-34能够改善TGF-β1诱导的系膜细胞阻滞,减少细胞的早衰、表型转化和纤维样增生。采用免疫荧光和RT-PCR法观察HUVEC细胞IKCa1的表达,常规MTT法分析不同浓度TRAM-34作用24、48、72 h后HUVEC细胞增殖的变化。结果免疫荧光和RT-PCR法均证实HUVEC细胞表达IKCa1。
TRAM-34浓度低于10μmol/L时作用不明显,而高于10μmol/L时能明显抑制HUVEC增殖,并随药物浓度升高而抑制作用增强,呈显著浓度依赖性。TRAM-34抑制作用呈时间依赖性,处理细胞72 h作用明显强于48 h,而24 h无明显变化。结论 HUVEC细胞表达IKCa1。TRAM-34能显著抑制HUVEC细胞增殖,其抑制作用呈浓度和时间依赖性。
参考文献
[1]Bradykinin-Induced Chemotaxis of Human Gliomas Requires the Activation of KCa3.1 and ClC-3.Cuddapah Vishnu Anand,Turner Kathryn L,Seifert Stefanie,Sontheimer Harald.The Journal of neuroscience:the official journal of the Society for Neuroscience.2013
[2]The inhibition of KCa3.1 channels activity reduces cell motility in glioblastoma derived cancer stem cells.Ruggieri Paola,Mangino Giorgio,Fioretti Bernard,Catacuzzeno Luigi,Puca Rosa,Ponti Donatella,Miscusi Massimo,Franciolini Fabio,Ragona Giuseppe,Calogero Antonella.PloS one.2012
[3]The Blockage of KCa 3.1 Channel inhibited proliferation,migration and promoted apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells.Liu Y,Zhao L,Ma W,et al.Journal du Cancer.2015
[4]High expression of KCa3.1 in patients with clear cell renal carcinoma predicts high metastatic risk and poor survival.Rabjerg M,Olivan-Viguera A,Hansen LK,et al.Plo S One.2015
[5]The inhibition by oxaliplatin,a platinum-based anti-neoplastic agent,of the activity of intermediate-conductance Ca-(2+)-activated K-+channels in human glioma cells.Huang MH,Huang YM,Wu SN.Cellular Physiology and Biochemistry.2015
[6]Activation of K-+channel by 1-EBIO rescues the head and neck squamous cell carcinoma cells from Ca-(2+)ionophore-induced cell death.Yin MZ,Park SW,Kang TW,et al.Korean J Physiol Pharmacol.2016
[7]Targeting proliferation of chronic lymphocytic leukemia(CLL)cells through KCa3.1 blockade.Grossinger EM,Weiss L,Zierler S,et al.Leukemia.2014
[8]姜天华,黄志刚.TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响[J].中国实验血液学杂志,2017,25(01):104-109.