研究背景
异绿原酸 A是一种天然多酚类化合物，具有抗氧化和抗炎活性，表现为白色至黄色结晶固体，完全不溶于水，但易溶于酒精和一些有机溶剂如甲醇、乙醇、DMSO中。该物质来源于金银花，忍冬，杜仲、菊花等植物，可用于含量测定/鉴定/药理实验等，具有清热解毒、抗菌消炎的药理药效。
有关研究
异绿原酸A具有抗氧化活性已见报道，但其抗氧化活性机制还未完全明确。相关研究利用斑马鱼模型，依据自由基一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的变化来探讨异绿原酸A的抗氧化机制。通过观察计数异绿原酸A对甲硝唑诱导的斑马鱼体内角质细胞减少的拮抗作用，从而初步考察异绿原酸A的抗氧化能力。通过观察异绿原酸A对脂多糖(LPS)诱导的斑马鱼炎症状态中体内NO和ROS含量及斑马鱼心率及卵黄囊面积的影响，从而确定异绿原酸A的抗氧化作用。通过观察异绿原酸A对硫酸铜诱导的斑马鱼炎症模型中巨噬细胞数量的变化，从而初步探讨异绿原酸A的抗炎活性。结果发现，对照组中斑马鱼的皮肤荧光点数最多，加入甲硝唑后绝大部分荧光点消失，再加入异绿原酸A后，荧光点能够再次更多的被观察到，异绿原酸A(25,50,100μg/mL)组的相对抗氧化能力分别为60.4%，48.0%，44.3%。异绿原酸A能降低LPS诱导的炎症状态下斑马鱼体内NO升高，活性氧的生成，斑马鱼心率升高和卵黄囊水肿，此作用具有浓度依赖性。异绿原酸A在实验浓度范围(5-40μg/mL)内能使CuSO4诱导的斑马鱼体内测线巨噬细胞数减少，且减少的数量随异绿原酸A浓度的升高而增多。以上结果说明，异绿原酸A有良好的抗氧化活性及抗炎活性，为相关中药的临床应用提供实验证据[1]。
关于异绿原酸 A的抑菌机制，以大肠杆菌为试验对象，采用体外抑菌试验研究异绿原酸A的抑菌活性，并通过测定异绿原酸A与菌作用前后细菌培养液260nm吸光度、电导率、碱性磷酸酶(AKP)活性的变化及NPN对大肠杆菌细胞壁的渗透情况，初步阐明异绿原酸A对大肠杆菌的抑菌机制。结果显示，异绿原酸A对大肠杆菌具有抑菌活性，且它的抑菌效果强于绿原酸。经绿原酸类物质处理后，细菌培养液的260nm吸光度,电导率和AKP活性均增大,NPN能渗透进入绿原酸,异绿原酸A作用后的大肠杆菌细胞壁.表明绿原酸,异绿原酸A可破坏细菌细胞壁，膜的结构，导致细胞通透性增加，进而使细胞内容物外泄。异绿原酸A对细菌细胞壁，膜结构的破坏作用强于绿原酸[2]。
随着异绿原酸 A的性质研究越来越深入，它在医药领域的应用也越来越广泛。比如，异绿原酸A在制备抑制瞬时感受器电位香草素受体3通道治疗瘙痒产品中便有一定应用。采用钙荧光方法和手动膜片钳技术证实异绿原酸A对瞬时感受器电位香草素受体3通道具有抑制作用，对组胺引起的小鼠急性瘙痒有止痒作用，因此可用于制备抑制瞬时感受器电位香草素受体3通道治疗瘙痒的产品[3]。
在肿瘤治疗方面，在20 μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)体外诱导MH7A细胞后，加入(0,0.04,0.09,0.13,0.16,0.20) μg/μL异绿原酸A处理。采用CCK-8法检测MH7A细胞增殖，TranswellTM小室法检测细胞侵袭和迁移能力，试剂盒检测MH7A细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)，活性氧(ROS),基质金属蛋白酶3(MMP3)的含量，免疫荧光细胞化学染色分别检测MH7A细胞BAX和Bcl2表达。结果发现， 20 μg/LTNF-α处理明显增加MH7A细胞增殖，侵袭和迁移，减少细胞凋亡。与TNF-α体外诱导相比，异绿原酸A能明显抑制MH7A细胞增殖，侵袭，迁移及MMP3分泌，增加ROS的释放，促进MH7A细胞凋亡，促进医疗的发展[4]。异绿原酸A在制备抑制PD1和PDL1蛋白之间相互作用的药物中也有应用。经研究发现，异绿原酸A可以作为PD1/PDL1蛋白相互作用的小分子抑制剂。因为PD1/PDL1信号通路与免疫应答，肿瘤免疫逃逸密切相关，抑制PD1/PDL1信号通路的异常激活能够起到预防及治疗肿瘤的作用，所以异绿原酸 A具有很大的肿瘤治疗潜力[5]。
我国对食品中亚硝酸盐含量提出了明确的限量标准，因此研究可清除食品中亚硝酸盐含量，抑制亚硝胺合成的亚硝化反应因素具有很大意义。研究人员测定了绿原酸、异绿原酸A抑制亚硝化反应的能力及最适作用条件。结果表明，绿原酸类物质清除亚硝酸盐及阻断亚硝胺合成的抑制亚硝化效果随浓度、反应时间和温度的升高逐渐增强，随pH的升高而降低。清除亚硝酸盐的最适浓度，pH，反应时间，温度分别为5μg/μL，3.4，40min和47℃；阻断亚硝胺合成的最适浓度，pH，反应时间和温度分别为3μg/μL，2.8，20min及47℃。在抑制亚硝化反应方面，绿原酸与Vc效果相当，弱于异绿原酸A。绿原酸和异绿原酸A都具有较好的抑制亚硝化反应的能力，且随反应体系环境的变化而存在差异[6]。
制备方法
以金银花为原料可以实现异绿原酸 A的提取制备，包括以下步骤：S1.原料的处理：将金银花洗净，干燥，粉碎后通过超微粉碎机粉碎；S2.超临界流体萃取：经过超临界流体萃取得到萃取液；S3.提取：加入二甲亚砜/乙腈混合溶剂，充分振荡后，静置分层，得到提取物；S4.脱色：加入活性炭，搅拌脱色，过滤，得到透明提取液；S5.再提取：加入甲醇水溶液，充分振荡后，静置，过滤；S6.浓缩：低温浓缩后得到浓缩液；S7.纯化：通过大孔树脂吸附柱进行饱和吸附，洗脱，浓缩，干燥后制得异绿原酸 A。本方法具有工艺先进，操作简便，过滤容易，成本低，无有害溶剂，纯度高，得率高，适用于工业化大批量生产等优点[7]。
参考文献
[1]侯彩平,何秋霞,韩利文,等.利用斑马鱼模型研究异绿原酸A的抗氧化和抗炎作用[C]//中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会论文集.2016.
[2]周志娥,罗秋水,熊建华,等.绿原酸、异绿原酸A对大肠杆菌的抑菌机制[J].食品科技, 2014, 39(3):5.DOI:CNKI:SUN:SSPJ.0.2014-03-060.
[3]王威,孙晓颖,王蓉蓉,等.异绿原酸A在制备抑制瞬时感受器电位香草素受体3通道治疗瘙痒产品中的应用:CN201811273634.9[P].CN109125312A.
[4]刘杨,王永萍,刘明,等.异绿原酸A抑制TNF-α引起的MH7A人成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和迁移并促进其凋亡[J].细胞与分子免疫学杂志, 2020(008):036.
[5]董子钢,刘康栋,李侎泫,et al.异绿原酸A在制备抑制PD1和PD-L1蛋白之间相互作用药物中的应用:CN202010376047.3[P].CN202010376047.3.
[6]胡昭君等.绿原酸,异绿原酸A抑制亚硝化反应研究[C]//2016第五届中国食品安全高峰论坛.2016.
[7]舒利.金银花异绿原酸A的制备方法:CN202010313081.6[P].CN111548271A.