背景技术
积雪草为伞形科积雪草属植物，广泛分布于长江流域以南各地，全草入药。积雪草甙和羟基积雪草甙是积雪草及其相关制品质量控制的两个指标成分，它们是积雪草中含有的两个三萜皂苷类成分其具有抗氧化、抗菌、调节免疫等功能，用于治疗顽固性创伤、皮肤结核等皮肤疾病 积雪草甙还具有抗肿瘤作用。 积雪草甙和羟基积雪草甙已作为指标成分用于积雪草及其相关制品的质量控制。
目前国内存在使用的积雪草甙和羟基积雪草甙纯度不高或无法提供克级高纯度对照品的问题这些均限制了积雪草的相关研究。积雪草中皂甙类成分的常规分离方法是采用硅胶柱反复分离然后重结晶获得。目前市场上销售的积雪草甙和羟基积雪草甙两种对照品主要是通过该方法获得的产品的纯度在95％以下。有采用高速逆流色谱法从积雪草中分离获得毫克级的皂甙类成分的报道。本文采用制备型高效液相色谱法在20ｍin的分离时间内完成分离制备了积雪草甙和羟基积雪草甙两个成分。通过薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)对获得的产品进行分析，产品纯度达到98％以上，可以作为积雪草甙和羟基积雪草甙对照品使用。本方法制备积雪草甙和羟基积雪草甙对照品具有高效快速、产品纯度高的特点可以作为制备高纯度的积雪草甙和羟基积雪草甙对照品的方法。
分离纯化
1.色谱条件
制备型HPLC条件:自填Microsorb C18柱(50 mm X200 mm,5μm);流动相:甲醇水(体积比为60:40),流速100mL/min;检测波长:220 nm;进样量:1.5mL。
分析型HPLC条件:大连江申公司装填的Mi-crosorbC18柱(4.6mmX250mm, 5μm);流动相:甲醇 水(体积比为60:40),流速1mLmin;检测波长:200 nm;进样量:10μL。
2.实验方法
称取积雪草粗甙样品6g甲醇溶解，配制成浓度为40mg/mL的溶液,过0.45μm微孔滤膜，供样品分析和制备使用。取处理后的样品溶液适量，用甲醇稀释10倍后进行分析,以积雪草甙、羟基积雪草甙对照品为对照,采用外标法定量，积雪草粗甙样品中含有积雪草甙20%,羟基积雪草甙45%。采用制备型HPLC系统进行制备纯化，多次进样，收集积雪草甙和羟基积雪草甙所在部分洗脱液，减压浓缩后,置于烘箱内干燥,得到0.8g积雪草甙和2g羟基积雪草甙。
参考文献
[1]高明哲,袁晓艳,肖红斌.制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品[J].色谱,2008,(03):362-365.