背景[1-3]
斑点气单胞菌PCR试剂盒是一种用于检测斑点气单胞菌的分子诊断试剂盒。该试剂盒基于聚合酶链式反应（PCR）技术，通过特定的引物扩增斑点气单胞菌的DNA片段，从而实现对该病原体的快速、准确检测。
斑点气单胞菌PCR试剂盒具有以下特点：
高特异性和灵敏度：试剂盒采用一对特异性引物，能够高特异地扩增斑点气单胞菌的DNA片段，同时具有较高的灵敏度，能够检测低浓度的斑点气单胞菌。
快速简便：该试剂盒操作简便，可在短时间内完成检测，大大提高了检测效率。
多种规格和用途：不同品牌的斑点气单胞菌PCR试剂盒可能有不同的规格和用途，可用于科研、临床诊断等多种领域。
在使用斑点气单胞菌PCR试剂盒进行检测时，需要注意以下几点：
严格按照试剂盒说明书进行操作，确保实验过程的准确性和可靠性。
注意实验环境的清洁和消毒，避免交叉污染。
对于阳性结果，需要进行复检和确证实验，以排除假阳性或污染的可能性。
对于临床样本的检测，需要结合患者的临床表现和其他检查结果进行综合分析，避免误诊或漏诊。
斑点气单胞菌PCR试剂盒
斑点气单胞菌PCR试剂盒的操作步骤如下：
1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。
2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。
3.PCR反应体系准备：根据斑点气单胞菌PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。
4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。
5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在斑点气单胞菌的感染。
应用[4][5]
斑点气单胞菌PCR试剂盒可以用于大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定及其对宿主免疫应答的影响
随着大口黑鲈养殖规模的扩大,在高温季节,各类病害问题的频繁发生已经成为制约产业发展的一个因素,在高温季节维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)引起的大口黑鲈暴发性死亡近几年不断发生,但目前对于大口黑鲈抗维氏气单胞菌免疫机制了解甚少。
利用转录组技术,对高温胁迫下大口黑鲈感染维氏气单胞菌死亡率的差异进行探究。此外,基于大口黑鲈全基因组与转录谱数据,展开大口黑鲈ASC基因的研究,分析其基因结构与功能、预测蛋白结构与功能、了解基因表达情况以及细胞定位,为深入开展大口黑鲈抗菌机制研究奠定基础。
主要研究内容如下:大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定为查明2020年春季广东省佛山市某养殖场人工养殖大口黑鲈鱼苗出现暴发性死亡的病因,该研究对患病大口黑鲈鱼苗肝脏组织中分离的一株细菌GZXR2020进行了斑点气单胞菌PCR试剂盒分子鉴定,PCR扩增获得该菌株的16S rRNA基因和gyrB基因全长序列,BLAST显示其与维氏气单胞菌的相应序列高度同源,同源性分别高于99.5%和98.3%。根据VITEK2全自动细菌鉴定系统45个理化项目的鉴定结果、羊血琼脂平板溶血实验呈β-溶血的结果,进一步通过毒力基因检测并结合补充理化鉴定结果,可判断此分离菌株为维氏气单胞菌温和生物型(A.veronii bv.sobria)。人工回归感染实验采用低、中、高3种菌液浓度(3×107、1.5×108和3×108CFU·m L-1)进行腹腔注射攻毒,可分别导致7%、40%和100%的死亡率,证实维氏气单胞菌温和生物型是引起此次大口黑鲈暴发性死亡的致病原。药物敏感性实验显示,在所检测的17种抗菌药物中,该菌株对大观霉素、氟罗沙星、氟苯尼考等7种药物敏感。
参考文献
[1]Aeromonas spp.diversity in U.S.mid-Atlantic surface and reclaimed water,seasonal dynamics,virulence gene patterns and attachment to lettuce[J].Solaiman Sultana;Micallef Shirley A..Science of the Total Environment,2021
[2]Characterization and expression analysis of tandemly-replicated asc genes in the Japanese medaka,Oryzias latipes[J].Morimoto Natsuki;Okamura Yo;Kono Tomoya;Sakai Masahiro;Hikima Jun-ichi.Developmental and Comparative Immunology,2021
[3]Specific Evolution and Gene Family Expansion of Complement 3 and Regulatory Factor H in Fish[J].Najafpour Babak;Cardoso João C.R.;Canário Adelino V.M.;Power Deborah M..Frontiers in Immunology,2020
[4]Response of gut microbiota and immune function to hypoosmotic stress in the yellowfin seabream(Acanthopagrus latus)[J].Genmei Lin;;Min Zheng;;Shizhu Li;;Jingui Xie;;Wenyu Fang;;Dong Gao;;Jing Huang;;Jianguo Lu.Science of the Total Environment,2020
[5]杨超.大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定及其对宿主免疫应答的影响[D].上海海洋大学,2023.