背景[1-3]
UO-31人肾癌贴壁细胞系是一种来源于人类肾癌组织的人源性肿瘤细胞系。这种细胞系在实验室中广泛用于研究肾癌的生物学特性、药物筛选和治疗策略的开发。
UO-31人肾癌贴壁细胞系具有以下特点：
形态特征：UO-31人肾癌贴壁细胞系呈多边形或长方形，具有丰富的胞质和较大的核。
生长特性：UO-31人肾癌贴壁细胞系在体外培养条件下生长迅速，具有较高的增殖能力。
遗传特征：UO-31人肾癌贴壁细胞系具有人类染色体的正常核型，但可能存在某些基因突变或表达异常。
药物敏感性：UO-31人肾癌贴壁细胞系对多种化疗药物(如顺铂、紫杉醇等)具有敏感性，可作为药物筛选的模型细胞。
研究应用：UO-31人肾癌贴壁细胞系广泛应用于肾癌的基础研究，包括肿瘤发生机制、分子靶点研究、药物筛选和治疗策略评估等。
虽然UO-31人肾癌贴壁细胞系具有一定的代表性，但仍存在局限性。因此，在进行实验研究时，应结合其他来源的细胞系和动物模型，以获得更全面的研究结果。
UO-31人肾癌贴壁细胞系
UO-31人肾癌贴壁细胞系培养操作
1)复苏UO-31人肾癌贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)UO-31人肾癌贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)UO-31人肾癌贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
UO-31人肾癌贴壁细胞系可以用于组蛋白甲基转移酶G9a通过抑癌基因SPINK5的表观遗传沉默促进肾癌的发展
对比正常的肾癌细胞系786-O,敲低G9a表达量后五个基因中只有SPINK5和p53上调。为了进一步分析这两个基因是否是G9a的下游靶点,我们用生物信息学分析检测到G9a和SPINK5之间存在相关性。通过ONCOMINE数据挖掘,显示G9a在6个细胞系中上调(ACHN,786-O,RXF393,UO-31人肾癌贴壁细胞系,TK-10,SN12C)。相反,在这些细胞系中SPINK5被下调。相关分析表明,在这些肾癌细胞系(ACHN,786-O,RXF393,UO-31人肾癌贴壁细胞系,TK-10,SN12C)中,G9a的表达与SPINK5的表达呈负相关。因此,假设SPINK5是G9a的下游目标基因之一。
使用si RNA,我们在稳定的敲低G9a的786-O细胞系和UO-31人肾癌贴壁细胞系中敲低了SPINK5的表达。通过划痕试验和Transwell小室侵袭实验,我们看到尽管G9a的低表达导致了肾癌细胞系的迁移和侵袭能力下降,但是紧接着敲低SPINK5之后肾癌细胞的迁移和侵袭能力得到了恢复。蛋白质印迹实验同样表明,敲低SPINK5的G9a地表达的786-O细胞和UO-31人肾癌贴壁细胞系的增殖,迁移和侵袭能力得到了增强。
参考文献
[1]Gold(I)-Catalyzed Cycloisomerization of 3-Alkoxyl-1,6-diynes:A Facile Access to Bicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-ones.[J].Hu Chao;;Wang Tao;;Rudolph Matthias;;Oeser Thomas;;Asiri Abdullah M;;Hashmi A Stephen K.Angewandte Chemie(International ed.in English),2020
[2]Total Synthesis of Aspidosperma and Strychnos Alkaloids through Indole Dearomatization.[J].Saya Jordy M;;Ruijter Eelco;;Orru Romano V A.Chemistry(Weinheim an der Bergstrasse,Germany),2019
[3]Phosphine-Catalyzed(3+2)Annulation of Isoindigos with Allenes:Enantioselective Formation of Two Vicinal Quaternary Stereogenic Centers.[J].Chan Wai-Lun;;Tang Xiaodong;;Zhang Fuhao;;Quek Glenn;;Mei Guang-Jian;;Lu Yixin.Angewandte Chemie(International ed.in English),2019
[4]Metabolite Profiling of Antiaddictive Alkaloids from Four Mexican Tabernaemontana Species and the Entheogenic African Shrub Tabernanthe iboga(Apocynaceae).[J].Krengel Felix;;Chevalier Quentin;;Dickinson Jonathan;;Santoyo Josefina Herrera;;Reyes-Chilpa Ricardo.Chemistry&biodiversity,2019
[5]李仁贵.组蛋白甲基转移酶G9a通过抑癌基因SPINK5的表观遗传沉默促进肾癌的发展[D].武汉大学,2020.