背景[1-3]
棕蜱通用PCR试剂盒是一种用于检测棕蜱的PCR试剂盒。棕蜱是一种常见的寄生虫，可以传播多种疾病，如莱姆病、斑疹伤寒等。该试剂盒包含以下主要成分：
PCR反应液：包含聚合酶、dNTPs、引物等，用于扩增棕蜱的DNA。
阳性对照：含有已知的棕蜱DNA，用于验证试剂盒的准确性和可靠性。
阴性对照：不含棕蜱DNA，用于排除假阳性结果。
样品处理液：用于提取和处理样品中的DNA。
缓冲液：用于调节PCR反应液的pH值和离子强度。
其他辅助试剂：如Tris-HCl、EDTA、BSA等，用于调节反应条件和提高反应效率。
使用棕蜱通用PCR试剂盒时，首先需要提取样品中的DNA，然后将其加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的特异性，可以确定样品中是否存在棕蜱的DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床实验室和研究机构对棕蜱的快速检测和鉴定。
棕蜱通用PCR试剂盒
棕蜱通用PCR试剂盒的操作步骤如下：
1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。
2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。
3.PCR反应体系准备：根据棕蜱通用PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。
4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。
5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在棕蜱的感染。
应用[4][5]
棕蜱通用PCR试剂盒可以用于森林革蜱和草原革蜱PCR-RFLP鉴别方法的建立及线粒体基因组序列分析
是建立一种森林革蜱和草原革蜱的分子鉴定方法,即以核糖体内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列为基础建立森林革蜱和草原革蜱的PCR-RFLP方法。通过提取森林革蜱和草原革蜱的基因组DNA,设计引物,棕蜱通用PCR试剂盒PCR扩增和测序,最终获得准确的森林革蜱和草原革蜱的ITS2序列,并运用DNAStar软件对所得序列的限制性片段长度多态性进行分析。研究发现,森林革蜱和草原革蜱ITS2的PCR扩增产物经限制性内切酶Spe I酶切后所得片段明显不同,森林革蜱ITS2 PCR产物不能被切开而草原革蜱则被切成两段。可见,运用PCR-RFLP方法可成功鉴别森林革蜱和草原革蜱。目前关于革蜱的研究主要局限于形态学、流行病学、综合防治及蜱传疾病等方面,而关于线粒体基因组方面的研究很少。
扩增森林革蜱线粒体的全基因组序列并对其结构特点进行分析,探讨革蜱属的进化分类关系。棕蜱通用PCR试剂盒结果显示,森林革蜱线粒体基因组全长为14945 bp,由13个蛋白质编码基因、2个非编码区、22个t RNA和2个核糖体RNA构成,各基因排列顺序与后沟类硬蜱相似。森林革蜱整个线粒体基因组核苷酸组成为A=38.89%,T=39.89%,G=8.94%,C=12.29%,A+T含量为78.78%。在森林革蜱的线粒体基因组t RNA-Glu和nad1之间存在一个插入基因,长度为127bp,含有3个重复序列“similar to nad1”。运用BI、ML和MP三种方法分别以森林革蜱线粒体基因组的13个蛋白质编码基因为标记构建系统进化树,结果发现三种建树方法所得结果一致或相似,即进化树分为两大分支,后沟类硬蜱和前沟类硬蜱各形成一个分支,森林革蜱位于后沟类硬蜱分支上。在后沟类这一分支中,革蜱属、扇头蜱属和凹沟蜱属均形成单一分支,而花蜱属和血蜱属形成复分支。革蜱属与扇头蜱属亲缘关系较其它蜱属近。
参考文献
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[5]郭东辉.森林革蜱和草原革蜱PCR-RFLP鉴别方法的建立及线粒体基因组序列分析[D].黑龙江八一农垦大学,2016.