背景[1-3]
Spinal Neurons Cells指的是脊髓神经元细胞，是一种重要的神经元类型，主要位于脊髓中，负责传递神经信号。脊髓神经元细胞在神经系统中的作用非常重要，它们可以接收来自其他神经元的信号并将其传递到全身，控制身体的运动和感觉。同时，脊髓神经元细胞也参与到自主神经系统的调节中，对维持身体正常生理功能具有重要作用。
该细胞系具有以下特点：
来源：spinal neurons cells细胞系来源于脊髓神经元组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。
形态特征：spinal neurons cells细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。
生长特性：spinal neurons cells细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中稳定生长。
特异性标志物：spinal neurons cells细胞表达多种特异性标志物，如神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase，NSE)、微管相关蛋白2(Microtubule-associated protein 2，MAP2)等，可用于鉴定其神经元特性。
其他特性：spinal neurons cells细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究神经系统疾病发生机制和药物筛选的模型。
脊髓神经元细胞的培养和研究对于了解神经系统的结构和功能、探索神经系统疾病的发病机制和治疗方案等方面具有重要意义。在实验研究中，通常会使用特定的培养基和条件来分离和培养脊髓神经元细胞，以便进行各种生物学和药理学实验。
Spinal Neurons Cells
Spinal Neurons Cells培养操作
1)复苏Spinal Neurons Cells：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)Spinal Neurons Cells传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)Spinal Neurons Cells冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
Spinal Neurons Cells可以用于钙敏感受体及钙蛋白酶在脊髓缺血再灌注损伤中的表达及意义
体外实验目的证实Spinal Neurons Cells内存在钙敏感受体(CaSR)和钙蛋白酶(calpain),通过建立Spinal Neurons Cells缺氧-复氧(A/R)的体外模型,并应用CaSR激动剂(Gd Cl3)和CaSR抑制剂(NPS2390)干预,研究CaSR和calpain在Spinal Neurons Cells缺氧-复氧(A/R)引起的细胞凋亡中的作用。
方法1取新生的SD大鼠脊髓组织,培养脊髓神经元细胞,行Spinal Neurons Cells鉴定(Neurofilament 200),同时应用免疫荧光证实CaSR和calpain在Spinal Neurons Cells内的共同存在。
2利用培养的新生SDSpinal Neurons Cells建立Spinal Neurons Cells缺氧-复氧(A/R)的体外模型,即采用95%氮气持续通入置有细胞培养板的密闭通气盒,37℃培养箱内培养1h,再用含2%B27,10%胎牛血清的Neurobasol-A液培养细胞24h。
3应用CaSR激动剂(Gd Cl3)和CaSR抑制剂(NPS2390)干预Spinal Neurons Cells缺氧/复氧模型(A/R):随机分为四组:正常对照组(control组);缺氧/复氧组(A/R);缺氧/复氧+激活剂组(A/R+Gd Cl3)以及缺氧/复氧+抑制剂组(A/R+NPS2390)。应用激光共聚焦显微镜(LCSM)测定脊髓神经元细胞内游离钙离子的变化;采用免疫印迹试验技术检测各组CaSR、calpain以及凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3的表达水平;运用原位末端标记法(Tunel)染色观察各组脊髓神经元细胞的凋亡情况。
结果1.CaSR和calpain表达于Spinal Neurons Cells的胞浆内。
2. 新生SDSpinal Neurons Cells缺氧/复氧(A/R)的体外模型建立成功,缺氧/复氧模型组中的CaSR和calpain表达较正常对照组明显升高。
3.应用激光共聚焦显微镜(LCSM)测定的脊髓神经元细胞内游离钙离子浓度的比较中,缺氧/复氧组(A/R)较正常对照组(control组)明显升高,与缺氧/复氧组(A/R)比较,缺氧/复氧+激活剂组(A/R+Gd Cl3)的脊髓神经元细胞内游离钙离子浓度进一步增加,而缺氧/复氧+抑制剂组(A/R+NPS2390)的脊髓神经元细胞内游离钙离子浓度则明显减少。采用免疫印迹试验技术检测及Tunel染色的结果显示:缺氧/复氧组(A/R)较正常对照组(control组)的CaSR、calpain以及凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3的表达水平升高,同时细胞凋亡增加。缺氧/复氧+激活剂组(A/R+Gd Cl3)凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3的表达进一步增加,同时细胞凋亡也进一步增加;而缺氧/复氧+抑制剂组(A/R+NPS2390)上述作用相反。
参考文献
[1]Genetics of parathyroid tumours[J].R.V.Thakker.Journal of Internal Medicine,2016(6)
[2]The cardiovascular system in familial hypocalciuric hypercalcemia:a cross-sectional study on physiological effects of inactivating variants in the calcium-sensing receptor gene[J].Niels Frederik Breum Jakobsen;;Esben Laugesen;;Lars Rolighed;;Peter H Nissen;;Per L?gstrup Poulsen;;Erling Bjerregaard Pedersen;;Leif Mosekilde;;Lars Rejnmark.European Journal of Endocrinology,2016(4)
[3]Autosomal dominant hypocalcaemia due to a novel CASR mutation:clinical and genetic implications[J].Lucia Gagliardi;;Morton G.Burt;;Jinghua Feng;;Nicola K.Poplawski;;Hamish S.Scott.Clinical Endocrinology,2016(3)
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[5]孙继芾.钙敏感受体及钙蛋白酶在脊髓缺血再灌注损伤中的表达及意义[D].苏州大学,2018.