背景[1-3]
22Rv1（人前列腺癌细胞）是一种源自异种移植的前列腺癌细胞系，最初是从阉割引起前列腺癌衰退又在其父亲的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代而得到的。这种细胞系表达前列腺特异抗原（PSA），并具有上皮细胞的形态和贴壁生长的特性。
22Rv1（人前列腺癌细胞）细胞在研究中具有多种应用价值。首先，它们可以用于研究前列腺癌的发病机制，包括雄激素受体信号通路、细胞周期调控、凋亡和侵袭转移等方面。其次，这些细胞也可以作为药物筛选的模型，用于评估不同药物对前列腺癌细胞的疗效和毒性。此外，22Rv1（人前列腺癌细胞）细胞还可以用于基因治疗和免疫治疗等研究。
在细胞培养方面，22Rv1（人前列腺癌细胞）细胞通常需要特定的培养基和条件来维持其生长和活性。一般来说，这些细胞可以在含有RPMI 1640培养基或MEM培养基的培养瓶中生长，同时添加10%的胎牛血清（FBS）和1%的抗生素-抗真菌混合物以防止污染。细胞的传代和冻存也需要遵循一定的操作规程，以确保细胞的稳定性和可靠性。
22Rv1（人前列腺癌细胞）
22Rv1（人前列腺癌细胞）培养操作
1)复苏22Rv1（人前列腺癌细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)22Rv1（人前列腺癌细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)22Rv1（人前列腺癌细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
22Rv1（人前列腺癌细胞）可以用于17-β雌二醇联合5-氮胞苷调控ERβ及p75NTR的表达并诱导22Rv1前列腺癌细胞凋亡的研究
探讨前列腺癌细胞中雌激素能否上调神经营养因子受体p75NTR的表达,进一步阐明雌激素治疗雄激素非依赖性前列腺癌的分子机制,提高雄激素非依赖性前列腺癌的治疗效果。
方法:培养22Rv1（人前列腺癌细胞）,分成四个实验组:1.)对照组;2.)单用雌激素组;3.)单用DNA去甲基化药物组;4.)联合应用雌激素及DNA去甲基化药物组。分别应用不同浓度的17-β-雌二醇及5氮胞苷处理22Rv1细胞。于药物作用后24小时、48小时、72小时,观察并记录细胞形态变化;MTT实验检测细胞生长增殖抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR、western-blotting实验检测雌激素受体ERα、ERβ,神经营养因子受体p75NTR、trkA基因表达情况的变化,另外通过western-blotting技术检测相应药物处理后核转录因子NF-κB蛋白在胞浆及胞核内分布改变来初步探讨药物作用后22Rv1细胞发生凋亡的机制。
结果:17-β雌二醇及5-氮胞苷能不同程度抑制22Rv1（人前列腺癌细胞）增殖,并诱导其凋亡,联合用药效果明显增强。17-β雌二醇抑制22Rv1细胞增殖的最适浓度为10-6M,单用其细胞增殖抑制率为13.87%,联合5氮胞苷(2μg/ml)后22Rv1（人前列腺癌细胞）增殖抑制率为41.8%。药物处理72小时后,单用17-β雌二醇组约23.6%22Rv1细胞发生凋亡,单用5氮胞苷组为29.2%,而联合用药组为52.9%(p＜0.05);17-β雌二醇能诱导ERβ及p75NTR表达,联合应用5氮胞苷后此作用明显增强(p＜0.05)。联合用药能明显抑制核转录因子NF-κB蛋白自胞浆转位至胞核内。
结论:22Rv1（人前列腺癌细胞）中雌激素能诱导神经营养因子受体p75NTR表达,DNA去甲基化药物能增强ERβ表达,并能加强雌激素诱导p75NTR表达的作用。雌激素及5-氮胞苷的作用与NF-κB信号通路抑制相关,雌激素联合DNA去甲基化药物通过调控ERβ及p75NTR的表达可能是治疗雄激素非依赖性前列腺癌的有效方法。
参考文献
[1]Crosstalk via the NF-κB signaling system[J].Soumen Basak;;Alexander Hoffmann.Cytokine and Growth Factor Reviews,2008(3)
[2]Estrogen signaling in cancer microenvironment and prediction of response to hormonal therapy[J].Shin-ichi Hayashi;;Yuri Yamaguchi.Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology,2008(3)
[3]Estrogen-regulated development and differentiation of the prostate[J].Stephen J.McPherson;;Stuart J.Ellem;;Gail P.Risbridger.Differentiation,2008(6)
[4]Tyrosine kinase inhibitor CEP-701 blocks the NTRK1/NGF receptor andlimits the invasive capability of prostate cancer cells in vitro[J].Claudio Festuccia;;Paola Muzi;;Giovanni Gravina;;Danilo Millimaggi;;Silvia Speca;;Vincenza Dolo;;Enrico Ricevuto;;Carlo Vicentini;;Mauro Bologna.International Journal of Oncology,2007(1)
[5]郁建迪.17-β雌二醇联合5-氮胞苷调控ERβ及p75NTR的表达并诱导22Rv1前列腺癌细胞凋亡的研究[D].浙江大学,2010.