背景[1-3]
MCP1抗体是针对单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1，简称MCP-1）的一种特异性抗体。MCP-1是一种重要的趋化因子，主要参与单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞的招募和活化过程。因此，MCP1抗体在免疫学研究中具有广泛的应用。
在制备MCP1抗体的过程中，首先需要通过合成或表达MCP-1蛋白来免疫小鼠，获得产生MCP1抗体的免疫细胞。接着，将这些免疫细胞与肿瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞系。然后，利用ELISA和其他生化方法，从杂交瘤细胞系中筛选出单克隆MCP1抗体。最后，通过蛋白A/G层析等方法对单克隆抗体进行纯化。
MCP1抗体
为了验证MCP1抗体的性能，研究者会采用多种方法。在免疫印迹（Western Blotting）中，使用MCP1抗体确认其能够特异性地识别和结合MCP-1蛋白，并验证其灵敏度。在免疫组化（Immunohistochemistry）中，观察抗体在不同组织中的表达情况，验证抗体的组织特异性，并通过可视化手段进行定位和分析。此外，流式细胞术（Flow Cytometry）也被用来检测细胞表面的MCP-1蛋白表达水平。
MCP1抗体的性能验证对于准确、可靠地探究MCP-1的功能至关重要。通过成功制备和表征MCP-1单克隆抗体，为进一步研究MCP-1的生物学功能和其在相关疾病中的作用奠定了基础。
应用[4-5]
MCP1抗体可以用于MCP-1/PI3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制
MCP-1通过PI3K/Akt信号通路活化体外大鼠小胶质细胞目的观察MCP-1在体外通过细胞内PI3K/Akt信号通路对大鼠小胶质细胞的激活作用。
方法将体外培养的大鼠小胶质细胞分为六组:空白对照组(I组)、MCP-1 1min组(II组)、MCP-1 10min组(III组)、MCP-1 20min组(IV组)、MCP-1 30min组(V组)、MCP-1+LY294002组(VI组)。收集细胞,通过免疫组化(n=4)、免疫荧光(n=4)、Western blots(n=4)的方法检测每组细胞p-Akt和OX-42的表达变化。结果免疫组化结果显示:与其他组比较,II、III组小胶质细胞p-Akt的MOD值显著增加(P<0.01);II组p-Akt的MOD值与III组差异无统计学意义(P>0.05);I、IV、V、VI各组之间p-Akt表达无统计学差异(P>0.05)。
免疫荧光和Western Blots结果显示:与I组相比,III组小胶质细胞p-Akt和OX-42表达显著增加(P<0.05);VI组与III组相比p-Akt和OX-42表达显著降低(P<0.05)。结论MCP-1可能通过激活PI3K/Akt信号通路活化体外大鼠小胶质细胞。
MCP1抗体激活骨癌痛大鼠脊髓背角PI3K/Akt信号通路目的观测在骨癌痛大鼠模型鞘内注射MCP-1中和抗体后,其痛阈的改变以及脊髓背角p-Akt表达的变化。
方法SPF级雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,体重190210g,随机分为5组(n=8):假手术组(I组),于大鼠左侧骨干骺端骨髓腔内注射10μl PBS液;假手术+MCP-1中和抗体组(II组),在注射PBS液后79d鞘内注射MCP-1中和MCP1抗体(1μg/μl)10μl,每天1次;骨癌痛组(III组),于大鼠左后肢胫骨干骺端骨髓腔内注射乳腺癌细胞Walker256 10μl(2×107/ml)构建胫骨癌痛模型;骨癌痛+对照Ig G组(IV组),在注射肿瘤细胞后79d鞘内注射对照Ig G(1g/L)10μl,每天1次;骨癌痛+MCP-1中和抗体组(V组),在注射Walker256细胞后79d鞘内注射MCP-1中和抗体(1g/L)10μl,每天1次。观测术前1d,术后1、3、5、7、8、9d各组大鼠机械痛阈。术后9d给药测痛后处死大鼠,取各组大鼠的L4-6脊髓组织进行免疫荧光染色和Western Blots,检测脊髓背角p-Akt的表达。结果与I组相比,骨癌痛(III、IV组)大鼠机械痛阈明显下降(P<0.01),脊髓背角p-Akt阳性细胞数显著增加,蛋白表达上调(P<0.01),而II组上述指标无明显差别(P>0.05)。与III组或IV组比较,V组鞘内注射MCP-1中和抗体后能明显提高骨癌痛大鼠的机械痛觉阈值(P<0.01),降低脊髓背角p-Akt的表达(P<0.01)。
参考文献
[1]Activation of spinal phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B mediates pain behavior induced by plantar incision in mice[J].Bing Xu;;Xue-Hai Guan;;Jun-Xiong Yu;;Jing Lv;;Hong-Xing Zhang;;Qiao-Chu Fu;;Hong-Bing Xiang;;Hui-Lian Bu;;Dai Shi;;Bin Shu;;Li-Sheng Qin;;Anne Manyande;;Yu-Ke Tian.Experimental Neurology,2014
[2]Protein Kinase B/Akt Is Required for Complete Freund's Adjuvant-Induced Upregulation of Nav1.7 and Nav1.8 in Primary Sensory Neurons[J].Lingli Liang;;Longchang Fan;;Bo Tao;;Myron Yaster;;Yuan-Xiang Tao.Journal of Pain,2013
[3]Changes in protein expression and distribution of spinal CCR2 in a rat model of bone cancer pain[J].Ji-Hua Hu;;Meng-Yao Wu;;Min Tao;;Jian-Ping Yang.Brain Research,2013
[4]Involvement of CX3CR1 in bone cancer pain through the activation of microglia p38 MAPK pathway in the spinal cord[J].Ji-Hua Hu;;Jian-Ping Yang;;Lei Liu;;Cai-Fang Li;;Li-Na Wang;;Fu-Hai Ji;;Hao Cheng.Brain Research,2012
[5]金迪.MCP-1/PI3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制[D].苏州大学,2016.