简介
羟基茜草素(Purpurin)是一种蒽醌类化合物,来源于茜草,具有抑制透明透明质酸结合蛋白自体活动和抗真菌等作用。茜草为茜草科植物茜草的干燥根及根茎,具有凉血、化瘀、止血、通经之功能。
检测方法[1]
一、色谱条件及适用性
色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250mmx4.6mm,5um);流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸(25:52:23);流速:1.0 mL/min;检测波长:250nm;柱温:30℃。在此色谱条件下,大叶茜草素和羟基茜草素的保留时间分别为16.5min和4.9min,茜草饮片中其他色谱峰对大叶茜草素和羟基茜草素峰无干扰,峰行尖锐,基线平稳。
二、对照品溶液的制备
2.1大叶茜草素贮备液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的大叶茜草素对照品25mg,置5mL量瓶中,加甲醇制成含秦皮甲素5 mg/mL的贮备液A,摇匀即得。
2.2羟基茜草素贮备液的制备:精密称取羟基茜草素10mg,置10mL量瓶中,加甲醇制成含羟基茜草素1mg/mL的贮备液B,摇匀即得。
2.3混合对照品溶液的制备:分别精密移取500 u L贮备液A和1mL贮备液B,置25mL量瓶中,加甲醇制成含大叶茜草素和羟基茜草素分别为100ug/mL和40 ug/mL的混合溶液,摇匀即得。
2.4供试品溶液的制备
取茜草样品粉末(过二号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇100mL,密塞,称定重量,放置过夜,超声处理30 min(功率250W,频率40kHz),放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液A用于大叶茜草素的含量测定。再精密量取续滤液50mL,蒸干,残渣加甲醇-25%盐酸(4:1)混合溶液20mL溶解,置水浴中加热回流水解30min,立即冷却,加入三乙胺3mL,混匀,转移至25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液B用于羟基茜草素的含量测定。供试品溶液使用前均以0.45um微孔滤膜过滤,进样。
研究进展[2~4]
1、大多数植物染料分子结构中含有多个羟基,可以作为金属离子的配位体。羟基蒽醌类也能与金属离子配位,在一定条件下可以制备金属络合植物染料。茜草色素是从茜草根和其他茜草科植物中分离出的天然色素。其中,羟基茜草素是其主要成分之一,属羟基蒽醌结构。在一定条件下使羟基茜草素与硫酸亚铁发生配位反应,可制备铁络合羟基茜草素络合染料P-Fe。齐迪等人以铁离子络合羟基茜草素制备的络合染料(P-Fe)为研究对象,研究了P-Fe络合染料对羊毛织物的染色性能。
2、茹晓等人在研究羟基茜草素对大鼠膝骨关节炎(OA)的软骨保护及抗炎作用,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)评估羟基茜草素对软骨细胞的毒性作用。结合Swiss Target Prediction.SuperPred.Sea.GeneCards.OMIM数据库筛选羟基茜草素治疗OA的潜在作用靶点,用AutoDock Vina 和Pymol软件对羟基茜草素与交集靶点进行分子对接。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测软骨细胞炎症相关基因和特征性基因的相对表达量。结果发现羟基茜草素对大鼠OA具有软骨保护作用,可减轻软骨细胞的炎症反应,可能是潜在的治疗关节炎药物。
3、侯滔等人采用HT-29细胞培养,以其高表达的GPR35受体为靶标,通过无标记细胞靶点药理学技术检测羟基茜草素对GPR35受体的激动活性,研究结果表明,羟基茜草素在HT-29细胞上能够引起DMR响应,且响应曲线类型与GPR35受体激动剂敏喘宁一致。此外,在HT-29细胞上羟基茜草素对GPR35受体激动剂敏喘宁有脱敏作用,GPR35受体拮抗剂ML145对羟基茜草素有拮抗作用。由此可以推断羟基茜草素为GPR35受体的激动剂。
参考文献
[1] 李芙蓉,陈世忠,罗世恒,等. UFLC法测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素[J]. 中草药,2010,41(12):2087-2089.
[2] 齐迪,丁洪,王祥荣. 羟基茜草素络合染料对羊毛的染色性能[J]. 印染,2022,48(6):23-27.
[3] 茹晓,钟秋伶,黄源钧,等. 羟基茜草素对大鼠膝骨关节炎的软骨保护及抗炎作用研究[J]. 广西医科大学学报,2023,40(4):594-602. DOI:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.04.011.
[4] 侯滔,丁辉,史丽颖,等. 羟基茜草素对GPR35受体激动活性的研究[J]. 世界科学技术-中医药现代化,2015(7):1414-1418. DOI:10.11842/wst.2015.07.015.