银杏内酯A与银杏内酯B是银杏中二萜内酯类化合物,是一类特异有效的血小板活化因子受体拮抗剂。此外,银杏总内酯还包括银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯M和白果内酯等。银杏总内酯中各单体的药效和功用存在一定差异。银杏内酯A、银杏内酯B对治疗心脑血管疾病具有显著疗效。为开发高效新药,控制药品质量,有必要对银杏内酯A和银杏内酯B进行高纯度分离。
传统的精制方法
文献报道的银杏内酯A、银杏内酯B单体分离方法主要有醇类提取―溶剂萃取―柱色谱分离法,醇类提取―溶剂萃取―反相色谱分离法,色谱分离―重结晶法和超临界流体萃取法(SCFE)等。
ZL00117758.3(《由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A,B的方法》):该方法是向银杏叶或其浸膏加入乙醇等浸取剂,得到的浸取液经过滤、分层,取出有机相去杂,然后经浓缩、干燥获得富集银杏内酯A和B,采用制备型液相色谱再分离A与B。该方法运用制备色谱进行分离,缺点在于制备银杏内酯A与银杏内酯B生产能力小,难于实现工业化。
ZL201010536023.6(《一种银杏内酯A的制备方法》):其特征在于包含下列步骤:将银杏叶粗提物用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离,即可;其中,所述的大孔反相吸附树脂的参数如下:粒径为50-l00μm,孔径为90-110A,树脂骨架为聚苯乙烯―二乙烯苯。该制备方法缺点在于只分离得到银杏叶中银杏内酯A,其它内酯类成分被舍弃,提高了该工艺的成本,浪费原料。
现有的方法中,有的只是得到一种银杏内酯A或银杏内酯B的单体成分,有的工艺流程较长,不易实现工业化。因此,需要研究能同时纯化银杏内酯A与银杏内酯B,适于工业化生产的精制方法。
发明内容
本发明提供一种银杏内酯A与银杏内酯B的精制方法。
本发明方法包括下列步骤:
(1)萃取:取银杏叶提取物浸膏,加入有机溶剂进行多次萃取,合并萃取液,回收溶剂至干,用含水乙醇定容至浓度为0.2-1.0g/ml;
(2)过柱层析富集:将上述药液通过反相吸附树脂柱进行富集,依次用不同浓度的含水乙醇进行除杂、洗脱,分段收集洗脱液,分别将洗脱液浓缩至浸膏,分别得到银杏内酯A与银杏内酯B粗品;
(3)结晶:将上述银杏内酯A与银杏内酯B粗品浸膏用含水乙醇进行多次重结晶,即得到高纯度的银杏内酯A与银杏内酯B精制品。
本发明所得银杏内酯A与银杏内酯B含量分别为95-98%。
本发明的优点主要在于:
①本方法通过乙酸乙酯萃取后,萃取液一次过柱即可分离银杏内酯A与银杏内酯B,提高原料的利用效率,节约成本。
②对银杏内酯A和银杏内酯B的粗品分别进行重结晶,提高了银杏内酯A和银杏内酯B单体的纯度。
③将结晶后的母液合并后并入下一批药液中继续过柱富集,提高了银杏内酯A与银杏内酯B的回收率。
本方法用银杏叶提取物为原料,工艺简单,减少损失,同时分离纯化银杏内酯A与银杏内酯B。全过程除乙醇和乙酸乙酯外,不用其它有机溶剂,可实现溶剂回收利用的绿色生产。产品纯度高,适于工业化生产,有较大的应用价值。