背景及概述
HEp-2/人喉表皮样癌细胞的类型：贴壁；形态：CM1-1培养液中，贴壁，上皮细胞样，多角形，梭形，成块生长。传代方法：将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；生长条件：37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。存储条件：冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。
相关研究[1-3]
贾建平等人探讨了ECRG4对人喉鳞癌细胞Hep-2侵袭转移能力的影响及机制。方法:设计并构建ECRG4过表达载体、并转染Hep-2细胞，Real-time PCR及Western Blot检测Hep-2细胞中ECRG4 mRNA和蛋白的表达;通过细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，应用Western Blot检测NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB p65在胞浆和胞核中的表达及转录因子Snail、EMT标志性分子E-cadherin，N-cadherin、Vinmentin蛋白表达。
结果:在Hep-2细胞中过表达ECRG4后，ECRG4 mRNA与蛋白表达水平显著升高，划痕和Tranwell实验表明过表达ECRG4可抑制细胞的迁移和侵袭;同时过表达ECRG4可下调细胞核中NF-κB p65蛋白表达，上调细胞浆中NF-κB p65蛋白表达;过表达ECRG4可上调EMT上皮标志物E-cadherin蛋白，下调转录因子Snail及EMT间质标记物Vimentin和N-cadherin蛋白表达。结论:ECRG4可能通过抑制NF-κB/Snail信号通路来抑制EMT的发生，进而抑制Hep-2细胞的侵袭转移。
赵越等人探讨了miR-362-3p在喉癌组织中的表达水平及其对喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。方法：收集50例喉癌组织及对应癌旁组织标本，实时PCR方法检测miR-362-3p在喉癌组织和癌旁组织中表达水平，分析miR-362-3p的表达与喉癌患者临床病理特征的关系;将miR-362-3p模拟物、抑制剂以及阴性对照miRNA分别转染喉癌Hep-2细胞，实时PCR检测转染效率;划痕和Transwell实验检测miR-362-3p对喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。结果 miR-362-3p在喉癌组织中表达水平显著高于癌旁组织(P <0.05)，且与喉癌患者淋巴结转移及临床分期有关;上调miR-362-3p表达水平能促进喉癌Hep-2细胞的迁移能力，下调miR-362-3p表达水平能抑制喉癌Hep-2细胞的迁移能力(均P <0.05)。结论 miR-362-3p在喉癌组织中表达上调，且能够促进喉癌细胞的迁移能力，提示其发挥潜在癌基因作用。
唐甜等人探究了抑制SHIP2对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移的影响;探究X射线处理喉癌Hep-2细胞后细胞增殖、凋亡和周期的变化及SHIP2的表达情况;探究靶向抑制SHIP2基因联合放射治疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和周期的影响及对放疗增敏的可能机制。
方法:(1)应用小分子干扰RNA技术抑制喉癌Hep-2细胞SHIP2的表达，实验分为5组:空白对照组(Control)、阴性对照组(Negative)、干扰组1(siRNA1)、干扰组2(siRNA2)、干扰组3(siRNA3)]，RT-qPCR、Western Blot检测转染24 h后干扰效果;
(2)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞，分别给予0，4 Gy X射线(SSD=100 cm)处理，CCK-8检测细胞增殖活力，AnnexinPI-FITC/PI双染检测细胞凋亡，PI单染检测细胞周期，RT-qPCR、Western Blot检测SHIP2 mRNA和蛋白的相对表达量;
(3)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞，实验分4组(空白对照组Control、单纯放射组4 Gy、干扰组siRNA-SHIP2、联合处理组siRNASHIP2+4 Gy)。Western Blot检测SHIP2、pSHIP2、pAKT、caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量。
结果:(1)转染24 h后干扰组2 siRNA2下调作用最显著，较空白对照组SHIP2 mRNA下调达60. 1%(P<0. 05)、SHIP2蛋白下调达57. 8%(P<0. 05);与空白对照组对比，siRNA2抑制SHIP2表达后喉癌Hep-2细胞增殖活力、侵袭和迁移能力降低，凋亡增加(P<0. 05)。
(2)与0 Gy组比较，放射组各组细胞增殖活力降低，凋亡和G2期阻滞增加(P<0. 05);4Gy射线处理后SHIP2 mRNA、SHIP2和pSHIP2蛋白的相对表达量较空白对照组降低(P<0. 05)。
(3)与空白对照组、siRNA-SHIP2组和4 Gy组比较，联合处理组细胞增殖活力降低，凋亡和G2期阻滞增加(P<0. 05)，SHIP2和pSHIP2、pAKT的相对表达量降低(P<0. 05)，caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量升高(P<0. 05)。
结论:靶向抑制SHIP2可与放射治疗协同抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖活力，促进细胞凋亡和细胞周期G2期阻滞，从而发挥放射增敏的作用。其可能机制是靶向抑制SHIP2表达通过下调PI3K/Akt信号通路活性，进而解除对下游促凋亡因子caspase3和周期阻滞因子P21和P27的抑制作用，与放射线协同增强对喉癌Hep-2细胞的杀伤作用，从而发挥放疗增敏作用。
主要参考资料
[1] 贾建平，孙晓慧.ECRG4对人喉鳞癌细胞Hep-2侵袭转移的影响及其分子机制[J].贵州医科大学学报，2019，44(02):178-183+189.
[2] 赵越，孙媛媛，佟雪，岳鹏杰，富伟能.miR-362-3p在喉癌组织中的表达及其对喉癌Hep-2细胞迁移的影响[J].中国医科大学学报，2019(03):236-239.
[3] 唐甜，肖祝雅，曾峰.SHIP2对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响及对放疗增敏的机制[J].武汉大学学报(医学版)，2019，40(02):226-234.