背景[1-3]
小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒是一种用于科学研究的工具，专门用于检测小鼠样本中的脑红蛋白含量。
小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒产品特点：
高灵敏度：能够检测极低浓度的小鼠脑红蛋白，通常最低检测浓度小于0.1 ng/mL。
高特异性：试剂盒中的抗体经过精心挑选和优化，确保不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性好：试剂盒的板内、板间变异系数均小于15%，实验结果稳定可靠。
应用广泛：不仅适用于小鼠，还可用于人、大鼠、猪、牛等多种物种的样本检测。
小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒注意事项：
试剂盒应存放在2-8℃条件下，避光防潮保存。
试剂盒从冷藏环境中取出后，应在室温平衡15-30分钟后再使用。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
试剂盒中的不同组分（如标准品、酶标试剂等）不得混用，且应按说明书要求妥善保存。
小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒
使用小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
应用[4][5]
小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒可以用于NGB和VEGF在糖尿病大鼠视网膜和脑中的表达特征及不同品系小鼠血糖变化特点分析
通过比较NGB和VEGF在糖尿病大鼠视网膜和脑中的表达变化，分析NGB和VEGF在糖尿病性神经损伤发病过程中的作用，以期找到糖尿病视网膜病变和糖尿病脑病之间可能存在的关联。
方法：选取健康成年雄性SD大鼠42只，随机分成正常对照组和糖尿病组，用链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）大剂量(55mg/kg)一次性腹腔注射诱导糖尿病模型。将正常大鼠和糖尿病分别随机分成1个月组、3个月组和6个月组。处死大鼠后，固定眼球和脑组织，石蜡包埋并切片。取切片组织进行HE染色光镜下观察视网膜和脑组织的形态变化，并用小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒及免疫组织化学方法检测脑红蛋白和VEGF在视网膜和脑组织中的表达。
小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒结果：1、视网膜HE染色结果观察：糖尿病3个月组，部分视网膜神经节细胞细胞核有固缩现象，随着糖尿病病龄的延长，神经节细胞固缩现象更明显，神经节细胞层有血管生成，内、外核层细胞排列稀疏。2、脑组织HE染色结果观察：在糖尿病6个月时，大鼠压后皮层细胞胞浆出现红染，并有少量细胞出现核固缩现象；海马齿状回区细胞减少，核仁不清晰，细胞核出现固缩现象。3、NGB在视网膜的表达：NGB在糖尿病大鼠视网膜内、外核层的表达量明显升高，并且随着时间的增长，糖尿病组视网膜内、外核层NGB的表达量也随之上升。4、NGB在脑中的表达：NGB从1个月起在糖尿病大鼠压后皮层区的表达升高，而海马齿状回区在糖尿病3个月时表达升高。5、VEGF在视网膜的表达：VEGF从1个月起在糖尿病组视网膜的表达量明显增加，并且随着糖尿病的发展，VEGF在视网膜全层的表达量随之升高。6、VEGF在脑中的表达：糖尿病组1个月时，VEGF在皮层的表达量略有上升但无统计学差异，从3个月起VEGF表达量明显上升；而在海马齿状回区VEGF表达上升。
小鼠脑红蛋白(NGB)Elisa试剂盒结论：1、NGB和VEGF在糖尿病大鼠视网膜和脑的表达量增加，并且随着时间的延长，表达量随之增加。2、在糖尿病视网膜病变中，NGB主要在视网膜神经节细胞层、内核层和外核层表达，而VEGF在视网膜全层表达。3、在糖尿病脑病中，NGB的表达要早于VEGF的表达。4、在糖尿病发病初期，NGB在视网膜和压后皮层的表达呈显著负相关。
参考文献
[1]Proliferative Retinopathy in Type 1 Diabetes Is Associated With Cerebral Microbleeds,Which Is Part of Generalized Microangiopathy[J].Woerdeman,Jorn;;van Duinkerken,Eelco;;Wattjes,Mike P;;Barkhof,Frederik;;Snoek,Frank J;;Moll,Annette C;;Klein,Martin;;de Boer,Michiel P;;IJzerman,Richard G;;Serné,Erik H;;Diamant,Michaela.Diabetes Care,2014(4)
[2]Neuroprotective effect of ginger in the brain of streptozotocin-induced diabetic rats[J].Gehan El-Akabawy;;Wael El-Kholy.Annals of Anatomy,2014
[3]Neurodegeneration in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats Is Attenuated by Treatment with Resveratrol[J].Jing,Yu-hong;;Chen,Kuan-hsing;;Kuo,Pei-ching;;Pao,Chia-chi;;Chen,Jan-kan.Neuroendocrinology,2013
[4]Diabetic retinopathy:Neuron protection as a therapeutic target[J].Xinyuan Zhang;;Ningli Wang;;Gaetano R.Barile;;Shisan Bao;;Mark Gillies.International Journal of Biochemistry and Cell Biology,2013(7)
[5]王瑞雪.NGB和VEGF在糖尿病大鼠视网膜和脑中的表达特征及不同品系小鼠血糖变化特点分析[D].广西医科大学,2014.