背景[1-3]
CHML抗体是指针对CHML（COMMD7,COMM domain containing 7）蛋白的特异性抗体。CHML是COMMD（Communication Module)家族的一个成员，这个家族的蛋白质在调节细胞内铜稳态、内吞作用、细胞存活和抵抗微生物感染等方面发挥着重要作用。CHML抗体作为一种重要的生物医学研究工具，在探究Choroideremia-like蛋白的功能和疾病机制方面发挥着重要作用。随着生物医学研究的不断深入和发展，CHML抗体的应用前景将更加广阔。
CHML抗体在科学研究中有多种用途，以下是一些可能的应用：
1.免疫沉淀（IP）：使用CHML抗体进行免疫沉淀实验，可以分离和纯化CHML蛋白及其相互作用蛋白，用于后续的蛋白质相互作用研究。
2.免疫印迹（Western blot）：在免疫印迹实验中，CHML抗体可以用来检测样品中CHML蛋白的存在和相对表达水平。
3.免疫荧光（IF）或免疫组化（IHC）：这些技术利用CHML抗体来在细胞或组织样本中定位CHML蛋白，帮助研究者了解其在细胞内的分布和定位。
4.流式细胞术（FC）：CHML抗体可以用于标记和检测细胞表面的CHML蛋白，从而对细胞群体进行分类和分析。
5.功能研究：通过使用CHML抗体中和或敲减CHML蛋白，研究者可以探讨CHML在细胞信号传导、代谢和其他生物学过程中的作用。
6.疾病研究：由于COMMD家族蛋白的异常与某些疾病状态相关，CHML抗体可以用于研究CHML在疾病发生和发展中的作用。
CHML抗体
CHML抗体进行免疫沉淀实验的基本步骤：
准备工作：
细胞裂解：首先需要裂解细胞，以释放出细胞内的蛋白质。这通常通过加入含有去污剂（如Triton X-100）和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液来实现。
抗体选择：选择针对CHML蛋白的特异性抗体。如果可能，选择已经验证过的、亲和力高的抗体。
预清洁beads：如果使用beads进行免疫沉淀，需要预先清洁beads以去除非特异性结合。
实验步骤：
1.抗体结合：将CHML抗体与beads结合。这通常通过在室温下将抗体与beads混合并在旋转器上轻轻旋转来完成。
2.抗体-蛋白复合物形成：将结合了抗体的beads与细胞裂解液混合，并在4°C下旋转孵育一段时间（通常1-2小时），以允许抗体与目标蛋白（CHML）形成复合物。
3.洗涤：孵育后，将beads通过离心分离，并去除上清液。然后使用裂解缓冲液洗涤beads几次，以去除非特异性结合的蛋白质。
4.蛋白洗脱：最后，通过加入洗脱缓冲液（如含有还原剂的SDS-PAGE样品缓冲液）来洗脱与beads结合的蛋白质。
5.分析：可以通过SDS-PAGE电泳、免疫印迹（Western blot）或其他蛋白质分析技术来分析洗脱下来的蛋白质。
应用[4][5]
CHML抗体可以用于稻瘟病菌Chm1假定效应蛋白的功能研究
稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）是研究真菌与植物互作关系最好的模式生物,其分生孢子是病害传播的主要结构,但稻瘟病菌的产孢机制目前还不是非常明确。MoRac1是小G蛋白Rho家族的成员之一,Chm1作为MoRac1的下游效应蛋白与MoRac1共同调控着稻瘟病菌的产孢过程。
本研究基于已有的RNA-seq数据以及酵母研究结果,选取3个预测的Chm1效应蛋白MoUbr2（MGG00409）、MoFre3（MGG07833）和MoSep3（MGG01521）,通过基因敲除等遗传和植物病理学方法研究它们的功能。分析结果表明,ΔMosep3在生长速度、分生孢子产生、隔膜形成、致病性等方面的功能均受到不同程度的影响,其部分表型与Δchm1相似,而ΔMoubr1和ΔMofre3却没有明显的变化;
CHML抗体Pull down和荧光定位结果表明,MoSep3与Chm1存在互作关系,MoSep3参与隔膜的形成,当隔膜形成后会降解于液泡中;CHML抗体细胞定位分析表明,Chm1蛋白大多弥散在细胞质中,同时在分生孢子的基部也有富集。综上结果说明,MoSep3与Chm1对稻瘟病菌的营养生长以及致病性至关重要,并可能共同参与了稻瘟病菌产孢过程的调控。
参考文献
[1]Septin-Mediated Plant Cell Invasion by the Rice Blast Fungus,Magnaporthe oryzae[J].Yasin F.Dagdas;;Kae Yoshino;;Gulay Dagdas;;Lauren S.Ryder;;Ewa Bielska;;Gero Steinberg;;Nicholas J.Talbot.Science,2012(6088)
[2]Pak protein kinases and their role in cancer[J].Bettina Dummler;;Kazufumi Ohshiro;;Rakesh Kumar;;Jeffrey Field.Cancer and Metastasis Reviews,2009(1-2)
[3]Targeting group II PAKs in cancer and metastasis[J].Jeyanthy Eswaran;;Meera Soundararajan;;Stefan Knapp.Cancer and Metastasis Reviews,2009(1)
[4]The transcription factor Con7p is a central regulator of infection‐related morphogenesis in the rice blast fungus Magnaporthe grisea[J]..Molecular Microbiology,2007(2)
[5]林莉莉.稻瘟病菌Chm1假定效应蛋白的功能研究[D].福建农林大学,2015.