背景[1-3]
PSKH1抗体是一种用于科学研究的试剂，主要用于检测PSKH1蛋白。PSKH1蛋白是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可能在细胞分裂、稳态和凋亡的调节中发挥重要作用。
PSKH1抗体在多种实验技术中均有应用，包括但不限于：
Western Blotting(WB)：用于检测细胞或组织中的PSKH1蛋白表达水平。推荐稀释度通常为1:500-1:3000，但具体稀释倍数应由研究人员根据实验条件确定。
Immunocytochemistry/Immunofluorescence(ICC/IF)：用于细胞染色，观察PSKH1蛋白在细胞内的定位。推荐稀释度通常为1:100-1:1000。
Immunohistochemistry-Paraffin(IHC-P)：用于石蜡切片染色，分析PSKH1蛋白在组织中的表达情况。推荐稀释度通常为1:100-1:1000。
ELISA：在某些情况下，PSKH1抗体也可用于ELISA实验，检测样品中的PSKH1蛋白含量。推荐稀释度可能较高，如1:20000。
PSKH1抗体
PSKH1抗体的使用步骤可能会根据具体的实验目的和实验室的标准操作流程有所不同，但以下是一个通用的使用步骤指南：
1.准备材料：
PSKH1抗体（根据实验需求选择适当类型）。
适当的缓冲液和稀释液。
实验所需的试剂和设备，如酶联免疫吸附试验（ELISA）板、移液器、洗液等。
2.抗体稀释：
根据制造商的推荐，将PSKH1抗体稀释到适当的浓度。
通常使用磷酸盐缓冲盐水（PBS）或含有0.1%牛血清白蛋白（BSA）的PBS作为稀释液。
3.样品处理：
如果需要，对样本进行适当的处理，如蛋白提取、稀释等。
确保样本符合实验要求，如pH值、蛋白质浓度等。
4.抗体孵育：
将稀释后的PSKH1抗体加入样本中，按照说明书推荐的孵育时间进行孵育。
孵育温度和条件根据实验方法而定，例如免疫印迹（WB）通常在室温下孵育，而免疫组化（IHC）可能在4°C下孵育过夜。
5.洗涤步骤：
使用适当的洗涤液（如PBS和Tween-20）洗涤样本，去除未结合的抗体。
重复洗涤步骤，通常需要洗涤3-5次。
6.检测：
根据实验方法，进行后续的检测步骤，如加入二抗、显色等。
对于ELISA，可能需要加入底物溶液，然后用酶标仪检测450 nm处的吸光度。
7.数据分析：
根据实验结果，分析PIAS1的表达水平或分布情况。
对照组和实验组的结果应进行比较，以评估实验的可靠性。
应用[4][5]
PSKH1抗体可以用于miR-24-3p/miR-200c-5p调控骨骼肌生成和肌纤维类型转化的分子机制
探究miR-24-3p和miR-200c-5p调控骨骼肌生成和肌纤维类型转化的功能和机制,以期从miRNA的角度解析肌肉生长发育的生物学过程,为畜禽肉品质的改善和肌肉相关疾病的治疗提供新的思路。
本研究的主要研究结果如下:miR-24-3p调节骨骼肌生成和肌纤维类型转化。研究发现,ssc-miR-24-3p在猪背最长肌(快肌)中的表达高于比目鱼肌(慢肌),且在猪骨骼肌原代细胞分化过程中上调。q PCR、Western blot（PSKH1抗体）、CCK-8和免疫荧光（PSKH1抗体）等实验发现,过表达miR-24-3p抑制猪骨骼肌原代细胞和C2C12成肌细胞增殖标志基因KI67、PCNA、CDK4、Cyclin D1和Cyclin E1的表达和增殖速率;上调分化标志基因Myo D、Myo G和My HC,促进肌管融合;促进快肌纤维标志基因Myh4的表达,下调慢肌纤维标志基因Myh7。敲低miR-24-3p后对骨骼肌细胞增殖、分化和肌纤维转化的影响与过表达相反。另外,mmu-miR-24-3p的表达在小鼠骨骼肌再生过程中先降低后升高。说明mmu-miR-24-3p在骨骼肌再生和肌生成中具有重要的作用。随后,在小鼠骨骼肌损伤重建中,过表达miR-24-3p下调了Pax7的表达,促进了Myo G和My HC的表达,以及肌纤维的生成。并且,在小鼠腓肠肌中过表达miR-24-3p可以促进Myh4的表达,增加快肌纤维的比例。miR-24-3p在猪和小鼠中是保守的。通过网站预测发现,MAPK14、NEK4、PSKH1、PIM1和NLK是mmu-miR-24-3p的靶基因,其表达与mmu-miR-24-3p在小鼠骨骼肌再生过程中相反;此外,这些预测靶基因在猪和小鼠慢肌纤维中的表达水平高于快肌,与miR-24-3p相反。进一步的双荧光素酶报告实验证明miR-24-3p与MAPK14、NEK4、PSKH1、PIM1和NLK间存在靶向关系。这些结果表明,miR-24-3p参与调控骨骼肌的生成和快慢肌纤维的转化,在不同物种间具有功能和调控机制的保守性。miR-200c-5p调节骨骼肌生成和肌纤维类型转化。
PSKH1抗体结果表明,mmu-miR-200c-5p在C2C12成肌细胞分化过程中下调。通过q PCR、Western blot、CCK-8和免疫荧光等实验发现,过表达miR-200c-5p后,抑制分化标志基因Myo G和My HC的表达和肌管融合;促进慢肌纤维标志基因Myh7和Myh2的表达;促进C2C12成肌细胞迁移标志基因Plac8、Eno1、P2y6、Fak、Rac1的表达和迁移行为。但是,对C2C12成肌细胞的增殖没有影响。另外,敲低miR-200c-5p后对骨骼肌细胞分化、迁移和肌纤维类型转化的影响与过表达相反。通过网站预测、RIP和双荧光素酶实验证明Adamts5是miR-200c-5p的一个直接靶基因。Adamts5在小鼠骨骼肌中高表达,其对C2C12细胞迁移和分化的调控作用与miR-200c-5p相反。另外,过表达miR-200c-5p能够挽救Adamts5对C2C12成肌细胞迁移和分化的调控作用。
参考文献
[1]circ-ZEB1 regulates epithelial-mesenchymal transition and chemotherapy resistance of colorectal cancer through acting on miR-200c-5p[J].Chen Hongyu;Zhang Jianwei;Yang Lei;Li Yansen;Wang Zhenjun;Ye Chunxiang.Translational Oncology,2023
[2]miRNA Biogenesis and Regulation of Diseases:An Updated Overview.[J].Vishnoi Anchal;Rani Sweta.Methods in molecular biology(Clifton,N.J.),2023
[3]Tryptophan alleviates lipopolysaccharide-induced muscle fiber type transformation from type I to II and modulates Sirt1/AMPK/PGC-1αsignaling pathway in pigs.[J].Wang Fang;Sun Weixiao;Liu Guangmang;Jia Gang;Zhao Hua;Chen Xiaoling;Wu Caimei;Wang Jing.Animal biotechnology,2022
[4]Role of lncRNA Has2os in Skeletal Muscle Differentiation and Regeneration[J].Chen Wanxin;Chen Weicai;Liu Peng;Qian Shiyu;Tao Shuang;Huang Mengchun;Xu Wanyi;Li Cuiping;Chen Xiaoyan;Lin Huizhu;Qin Zhenshu;Lu Jianxi;Xie Shujuan.Cells,2022
[5]刘艳文.miR-24-3p/miR-200c-5p调控骨骼肌生成和肌纤维类型转化的分子机制[D].华中农业大学,2023.