背景[1-3]
人肾损伤分子1(Kim-1)Elisa试剂盒是一种用于科研实验的检测工具，专门用于测定人血清、血浆及相关液体样本中肾损伤分子1（Kim-1）的含量。人肾损伤分子1（KIM-1）是一种在肾脏缺血或毒性损伤后表达显著增加的Ⅰ型跨膜糖蛋白。它在正常肾组织中几乎不表达，但在肾小管损伤后，KIM-1 mRNA和蛋白的表达都会迅速增加。KIM-1首次在2002年被用作急性肾损伤（AKI）的生物标志物。与传统的肾功能测量指标相比，KIM-1具有更高的灵敏度和特异性，能够更早地反映肾小管损伤的情况。因此，KIM-1被认为是诊断和监控肾损伤的敏感生物标志物。
人肾损伤分子1(Kim-1)Elisa试剂盒
以下是关于该试剂盒的详细介绍：
一、基本信息
产品名称：人肾损伤分子1（Kim-1）ELISA试剂盒
英文名称：Human Kidney Injury Molecule 1(Kim-1)ELISA Kit
用途：仅供科研使用，不得用于临床
检测方法：双抗体夹心法（部分产品可能采用酶联免疫法）
样本类型：血清、血浆、尿液、组织标本及相关液体
保存条件：冷藏2-8°C
保质期：一般为6个月至12个月，具体以产品说明书为准；
二、产品组成
人肾损伤分子1（Kim-1）ELISA试剂盒通常包含以下组件：
酶标包被板
标准品（含原倍标准品及稀释液）
样品稀释液
显色剂A液和B液
终止液
30倍浓缩洗涤液
封板膜
说明书
三、人肾损伤分子1(Kim-1)Elisa试剂盒操作步骤
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
应用[4][5]
人肾损伤分子1(Kim-1)Elisa试剂盒可以用于KIM-1、NGAL在氨基糖苷类药物致肾毒性模型中的表达
建立氨基糖苷类药物诱导的体内、体外肾毒性模型,通过研究肾损伤早期生物标志物肾损伤分子-1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的表达,探讨此模型在氨基糖苷类抗生素早期肾毒性评价筛选中的应用价值,为新药研发和该类药物。肾毒性评估提供依据与标准。
实验研究分为两部分。第一部分研究KIM-1与NGAL在庆大霉素诱导的大鼠肾脏中的表达。将45只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、庆大霉素低剂量组(50mg/kg)和庆大霉素高剂量组(100mg/kg),每组15只,连续给药7天,对照组给予等体积0.9%氯化钠注射液。给药第1、3、7天分别处死各组5只大鼠,腹主动脉采血检测血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平,肾组织切片HE染色观察病理改变,荧光定量PCR法检测基因mRNA表达水平,人肾损伤分子1(Kim-1)Elisa试剂盒和免疫组织化学SP法检测蛋白表达部位及表达水平。
第二部分研究KIM-1与NGAL在庆大霉素和奈替米星诱导的体外肾细胞系中的表达。将庆大霉素、奈替米星作用于人肾小管上皮细胞系(HK-2),分别于2h、6h、12h、24h、36h和48h提取细胞mRNA,通过荧光定量PCR法及人肾损伤分子1(Kim-1)Elisa试剂盒检测KIM-1与NGAL的基因表达水平。结果发现,连续7天对SD大鼠注射庆大霉素后,与对照组相比,低剂量组和高剂量组大鼠的SCr水平仅在给药第7天明显升高,血尿素氮含量在低剂量组给药第7天升高,高剂量组均高于对照组,且在给药第7天达到最高值；病理组织学观察显示,低剂量组在给药第7天可见肾小管上皮细胞空泡变性、颗粒变性,高剂量组在给药第3天开始出现小管上皮细胞变性,给药7天后近端小管刷状缘消失,上皮细胞变性、坏死、脱落,间质炎性细胞浸润,髓质部可见蛋白管型；实时荧光定量PCR结果显示,KIM-1和NGAL的mRNA表达水平均在给药第1天就显著上调,之后呈时间-剂量依赖性升高,与病理组织学改变过程相一致,且优先于临床生化检测指标；
免疫组化检测及人肾损伤分子1(Kim-1)Elisa试剂盒结果证明,KIM-1与NGAL蛋白均表达于肾近端小管上皮细胞中,KIM-1更集中在近端小管S3段丰富的外髓质区域及皮质区域,两者蛋白表达水平与基因表达水平基本相一致。而在体外细胞模型中,KIM-1与NGAL在庆大霉素、奈替米星损伤HK-2细胞后,均持续低表达,且表达量不随时间依赖性增加。
参考文献
[1]Urinary NGAL and KIM-1:Biomarkers for Assessment of Acute Ischemic Kidney Injury Following Nephron Sparing Surgery[J].Zaid Abassi;;Amjad Shalabi;;Rima Sohotnik;;Omri Nativ;;Hoda Awad;;Bishara Bishara;;Victor Frajewicki;;Igor Sukhotnik;;Abeer Abbasi;;Ofer Nativ.The Journal of Urology,2013
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[3]NGAL-Siderocalin in kidney disease[J].Neal Paragas;;Andong Qiu;;Maria Hollmen;;Thomas L.Nickolas;;Prasad Devarajan;;Jonathan Barasch.BBA-Molecular Cell Research,2012(9)
[4]In vitro Evaluation of Biomarkers for Cisplatin-Induced nephrotoxicity using HK-2 Human Kidney Epithelial Cells[J].So-Jung Sohn;;Sun Young Kim;;Hyung Sik Kim;;Young-Jin Chun;;Soon Young Han;;Seung Hee Kim;;Aree Moon.Toxicology Letters,2012
[5]陈梦鹿.KIM-1、NGAL在氨基糖苷类药物致肾毒性模型中的表达[D].四川农业大学,2014.